[发明专利]一种重组传染性造血器官坏死病毒及其构建方法与应用

权利要求书

1.重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述重组传染性造血器官坏死病毒与改造前的传染性造血器官坏死病毒相比，差别仅在于在所述重组传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的P基因和M基因之间还含有目的蛋白的编码基因；

所述目的蛋白的编码基因为靶标病毒的抗原基因；

所述靶标病毒的抗原基因为传染性胰脏坏死病毒的VP2基因；

所述改造前的传染性造血器官坏死病毒为传染性造血器官坏死病毒BLk94株。

2.根据权利要求1所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒为传染性胰脏坏死病毒ChRtm213株。

3.根据权利要求1所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的所述P基因编码SEQ ID No.1所示的磷蛋白。

4.根据权利要求1所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的所述M基因编码SEQ ID No.2所示的基质蛋白。

5.根据权利要求2所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒的VP2基因编码SEQ ID No.3所示的VP2蛋白。

6.根据权利要求3所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的所述P基因的编码区的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

7.根据权利要求4所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的所述M基因的编码区的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

8.根据权利要求5所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒的VP2基因的编码区的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

9.根据权利要求1所述的重组传染性造血器官坏死病毒，其特征在于：所述重组传染性造血器官坏死病毒与所述改造前的传染性造血器官坏死病毒相比，差别仅在于将所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中位于所述P基因的编码区和所述M基因的编码区之间的A片段替换为了片段B；所述片段A的序列为SEQ ID No.7；所述片段B的序列为SEQID No.8。

10.一种制备权利要求1-9中任一所述的重组传染性造血器官坏死病毒的方法，包括如下步骤：将含有所述重组传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA对应的cDNA序列的重组质粒和辅助质粒共转染EPC细胞，从而获得所述重组传染性造血器官坏死病毒。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述含有所述重组传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA对应的cDNA序列的重组质粒中启动所述重组传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA对应的cDNA序列表达的启动子为T7启动子。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述辅助质粒共有4个：含有所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中N基因的编码区对应的cDNA序列的辅助质粒1；含有所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中P基因的编码区对应的cDNA序列的辅助质粒2；含有所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中NV基因的编码区对应的cDNA序列的辅助质粒3；含有所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中L基因的编码区对应的cDNA序列的辅助质粒4。