[发明专利]一种基于G-wire纳米结构的共振光检测试剂盒及检测miRNA-122的方法

说明书

本发明公开了一种基于G‑wire纳米结构的共振光检测试剂盒及检测miRNA‑122的方法；其中共振光检测试剂盒包括共振光探针、Mg²⁺、K⁺、缓冲溶液。本发明通过诱导G‑wire的形成实现了实际样品中miRNA‑122的检测。线性范围为50pM‑300nM，检测限为6.1pM，表明该共振光检测试剂盒具有高灵敏度和高选择。此外，该方法避免了复杂的修饰过程，并且对细胞裂解液中的靶标有良好响应，可以进一步应用在生物医学和临床诊断上。

技术领域

本发明涉及分子检测领域，特别涉及一种基于G-wire纳米结构的共振光检测试剂盒及检测miRNA-122的方法。

背景技术

G-四连体DNA由富G的DNA分子组成，通过Hoogsteen氢键作用将四个鸟嘌呤(G)残基结合成G-四连体(G4)。在具有特定金属阳离子的情况下，G-四连体会自发地组装成G-wire，由于G-wire结构具有独特的光学和电化学特性，所以被用于生物分子和离子的检测。Ye等人开发了一种将光电化学与G-wire结构相结合的方法用于miRNA的检测，但该方法需要复杂的制备工艺和基底材料，从而增加了操作的复杂性[Ye,C.,Wang,M.Q.,Luo,H.Q.,Li,N.B.Anal.chem.2017,89,11697-11702]。Ren等人通过将G-wire与特定的T-Hg²⁺-T结构以及Exo-III辅助目标物循环相结合，构建了一个放大的共振瑞利散射光(RRS)适配体传感器用于检测Hg²⁺，但这种方法需要使用酶，使得整个实验系统的反应条件更加苛刻[Ren,W.,Zhang,Y.,Chen,H.G.,Gao,Z.F.,Li,N.B.,Luo,H.Q.Anal.chem.2016,88,1385-1390]。另外，上述检测方法在设计上都具有昂贵和耗时的缺点，因此，基于G-wire结构来开发一种低成本、免标记、免酶并且具有高灵敏度与高选择性的检测试剂盒来实现对生物分子的检测是非常有意义的。

发明内容

本发明首次通过将G-wire纳米结构与共振光散射技术相结合构建了一种共振光检测试剂盒，可以实现对生物分子高效、快速、高灵敏的检测。以miRNA-122为目标物，本发明所采取的技术方案是：

一种基于G-wire纳米结构的共振光检测试剂盒，包括DNA1、DNA2、Mg²⁺、K⁺、缓冲溶液。其中：

所述DNA序列号为：

DNA1:5'-CAAACACCATTGTCACACTCCA-3'

DNA2:5'-AGGGTGGGGTGGGACAGGGGTGTTTG-3'

进一步地，DNA1的粗斜体碱基是miRNA-122的互补序列；DNA2的粗斜体碱基是DNA1的互补序列；DNA2的下划线碱基是DNA1粗斜体碱基的错配碱基。

进一步地，K⁺有利于G-四连体的形成，Mg²⁺可以促使G-四连体进一步自组装成丝状的G-wire。

一种基于G-wire纳米结构的共振光检测试剂盒及检测miRNA-122的方法，其特征包括以下步骤：

(1)将浓度和体积都是2μM、100μL的DNA1、DNA2在离心管中混合得到双链DNA(dsDNA)；

(2)将100μL不同浓度的目标miRNA溶液加入到混合物中，摇匀后，在37℃下反应40分钟。

(3)将200mM MgCl₂和200mM KCl加入到溶液中，然后在4℃下孵育2小时

(4)进行低聚物溶液共振光散射强度的测定。