[发明专利]用于评价质谱成像制备质量的方法及其套件

说明书

本发明涉及一种方法，该方法使用与分析组织切片一同处理和测量的参考样品来评价用于质谱成像的分析组织切片的制备质量，本发明还涉及包括此类参考样品的用于质谱成像试验的套件。由于所述方法的再现性，因此特定参考组织类型和组织条件的结果对于大量的类似测量是有效的。这样一来，该方法能够得出一般性结论，其无需对待研究的每个单独样品实施优化方法。

技术领域

本发明涉及用于质谱测量的质谱成像制备质量的实际客观评价，所述质谱成像制备特别是福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的组织，

并且还特别地使用基质辅助激光解吸/电离(MALDI)技术。

背景技术

Richard M.Caprioli(当时在德克萨斯大学休斯顿分校)率先使用MALDI技术进行组织的质谱成像。图1和图2摘自他的公开美国专利No.5,808,300，其全部内容通过引用并入本文。图1以流程图的形式示出了对来自动物组织的图像分析的典型试验步骤。据称试验方案可能涉及正常代谢事件、药物治疗、肿瘤生长等。图2同样以描述成流程图的形式示意性示出了整体成像过程。示例性组织包括被标示为A和P的两个区域，其分别包含独特的目标分子(A分子和P分子)。该方法的目的一直并且仍然为对这些分子或任意其他可检测的目标分子在组织中的分布进行定位，其中所述组织可以被理解为来自共同完成特定功能的相同来源的相似细胞的集合。

更详细地，图1概括地示出了通过MALDI质谱法获得生物组织的图像分析的示例性步骤。其示出了大鼠的试验方案，将大鼠处死并用于产生组织切片。将组织切片清洗，干燥，然后安装在靶材上。可以使用电喷雾或其他合适的技术将合适的能量吸收基质施加到组织切片上，然后进行干燥。然后对具有干燥基质的组织切片进行图像分析处理，其中激光束照射组织切片以释放目标分子。

进一步更详细地，图2示出了其上具有组织切片的样品载板，

并且概念性地示出了当载板相对于光束移动时，用于照射位于不同定位的组织样品的激光束。然后如图所示将样品栅格化为不同的位置，从而生成映射组织切片上的A分子和P分子的质谱。这些质谱数据可以被转移至计算机并且合并为具有分子A和分子P的峰的质谱。然后可以示出总的离子图像，或者可选地，示出经选择的分子A的离子图像或经选择的分子P的离子图像。

迄今为止，许多研究已经显示了MALDI成像在临床研究中的巨大潜力以及将来用于辅助诊断的潜能。然而，MALDI成像(特别是在FFPE切片的分析中)被认为是一种复杂的技术，在样品的制备中需要许多步骤。为了MALDI成像的优化利用，特别是在设计诊断工作流程时，有必要从稳健性和质量的角度，对制备工作流程和每个步骤的条件以及样品的处理进行优化。虽然可以直接由FFPE组织分析内源性代谢物和聚糖[A.Ly et al.,High-mass-resolution MALDI mass spectrometry imaging of metabolites from formalin-fixedparaffin-embedded tissue,Nat Protoc(2016)11(8):1428-43；以及T.W.Powers et al.,Matrix assisted laser desorption ionization imaging mass spectrometryworkflow for spatial profiling analysis of N-linked glycan expression intissues,Anal.Chem.(2013)85(20):9799-806]，但是最常见的方法为进行空间分辨的组织胰蛋白酶消化[R.Casadonte et al.,Proteomic analysis of formalin-fixedparaffin-embedded tissue by MALDI imaging mass spectrometry,Nat Protoc(2011)6(11):1695-709]。该消化步骤是必要的，因为FFPE交联了目标蛋白，所以不能直接对其进行测量。