[发明专利]一种高活性人造血管支架的制备方法

说明书

本发明涉及人造血管支架的制备方法，具体涉及一种高活性人造血管支架的制备方法，属于组织工程技术领域。本发明通过离心纺丝制备胶原蛋白/聚己内酯纳米膜，将其卷绕成管状，然后将纤维材料按照一定方向排列在纳米膜表面形成定向纤维层，从而制备出人造血管支架。此方法制造出的人造血管支架生物相容性较好，血管中的胶原蛋白有利于诱导细胞分化，促进伤口愈合，加快细胞增殖，血管生物活性高，且由于血管取向度较高，也同时有利于细胞的有序排列。

技术领域

本发明涉及人造血管支架的制备方法，具体涉及一种高活性人造血管支架的制备方法，属于组织工程技术领域。

背景技术

随着人类生活条件的提高，血管类疾病的发病率也日益增加，治疗血管类疾病有效手段之一就是血管移植。但由于用于移植的异体血管数量稀少无法满足医疗需求，故人造血管成为最合适的代替品。20世纪50年代起，科研人员开始了纺织型人造血管的制造历史。目前，纺织型人造血管已广泛地应用于临床，替换人体内已坏损的血管，并取得了较好的医疗效果。

研究表明，血管中的细胞是成一定的取向排列的，其特定排列为血管的功能提供了很多作用，比如血管外层中的平滑肌细胞，其在外层结构中始终是对齐的沿着圆周取向排列的，这对于血管在环境温度响应的条件下的收缩作用至关重要。研究表明人造血管的成分对其细胞生长分化也具有很大影响，血管的生物活性高，则细胞生长速度快，另一方面血管壁中纳米纤维的排列方向也对于细胞生长方向、粘附方向都有很重要的引导作用，纤维的对齐度越高其细胞排列的对齐度也越高，并且随着培养时间的增加，其对齐度在逐渐增加，而无序的纳米纤维则会导致细胞的无序生长。

中国专利公布号CN103590194A，公开日期为2014年2月19日，发明名称为一种生血管微米复合纤维片材料的制备方法，该发明制备了一种生血管微米复合纤维片材料，通过在静电纺聚乳酸(PLA)微米纤维上利用静电力结合制备包封血管内皮生长因子(VEGF)的聚乳酸-己内酯共聚物(PLGA)微米颗粒，PLGA微米颗粒能够持续地释放内皮生长因子(VEGF)，而径直排列的PLA微米纤维则可以指导细胞沿着纤维的取向粘附，同时沿着排列的纤维释放生长因子从而引导成熟的功能性新生血管的空间和取向排布，达到能够控制其空间和取向、增加血管密度的目的。

中国专利公布号CN107376016A，公开日期为2017年12月24日，发明名称一种重组蛛丝蛋白小口径人造血管支架的制备方法，该发明以大腹园蛛基因组为模板，采用PCR技术得到梨状腺丝重复区，并与pLX载体连接，构建重组质粒，转入BL21中进行表达，使用变性纯化手段，获得重组蛛丝蛋白溶液，并进行冻干，得到干蛋白，然后采用静电纺手段，与PLCL共混，得到小口径人造血管支架。

以上专利都是通过静电纺丝制备人造血管支架，其中前者血管中排列的纤维释放生长因子从而引导成熟的功能性新生血管的空间和取向排布，后者通过干蛋白与PLCL共混制备人造血管支架，制得的血管生物活性较高，但静电纺丝其工作效率低，且工作需高压静电，对纺丝溶液要求也较高，工艺相对复杂。

发明内容

针对上述存在问题，本发明的目的在于提供出一种高活性人造血管支架的制备方法，本发明的具体技术方案为：

一种高活性人造血管支架的制备方法，所述制备方法按照以下步骤进行：

a.胶原蛋白/聚己内酯溶液的制备

将胶原蛋白和聚己内酯溶于六氟异丙醇中，溶液质量分数为10％～20％，以200～800r/min的速度在20～60℃环境下进行时间为10～18h的搅拌；溶解完全后得到均匀透明的胶原蛋白/聚己内酯溶液，将搅拌完成后的胶原蛋白/聚己内酯溶液放入真空度为-0.1～-0.05MPa的环境下脱泡2～6h，即得到均匀的胶原蛋白/聚己内酯溶液。

其中，溶液中胶原蛋白和聚己内酯的比例为3:7～7:3；

b.定向纤维层的制备