[发明专利]一种番杏组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种番杏组织培养快速繁殖方法。本发明从种子萌发获得无菌苗到获得栽培苗只需要90d，大大加快了番杏的繁殖速度，通过继代增殖，每个月可以增殖10.33倍左右，因此可以在短时间内获得大量的组培苗，组培苗经过移栽后，其成活率高达86％，从而能够使番杏这传统的中草药和新型的蔬菜能都更好的发展，为今后更进一步利用该物种奠定良好的基础。本发明的方法操作简单，易于实施，所用的培养基和试剂易配置，成本低，易大范围推广。

技术领域：

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种番杏组织培养快速繁殖方法。

背景技术：

番杏(Tetragonia tetragonioides)系番杏科(Aizoaceae)番杏属(Tetragonia)肉质草本，目前主要分布在江苏、浙江、福建、广东、云南等地。其使用方法也呈现一定的地域性，在云南主要作为一种传统草药，清热解毒、祛风消肿，在广东地区则多作为一种野生蔬菜，药食同源，治疗肠炎、败血症等。现代研究表明，番杏具有很好的抗癌、消炎、免疫调节、降血脂等功效。

利用植物外植体在固体培养基上培养，获得愈伤组织或完整植株，即为植物组织培养，也称离体培养或外植体培养。由于不同类型的植物在离体培养所需要的培养条件及方法等方面存在很大的不同，根据具体的植物，调整培养基类型、培养光照及温度、不同培养阶段培养基生长调节剂配比，分别诱导不定芽的形成，在此基础上建立有效的芽繁殖体系和植株再生体系。目前运用植物组织培养技术开展植物的保护和繁殖在很多植物种上已获得成功。

但是，到目前为止，番杏的组织培养方面的研究，国内报道很少，且本研究与前人的研究有很多不同。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种能在短期内获得大量番杏栽培苗的番杏组织培养快速繁殖方法。

本发明的番杏组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

S1、无菌苗的获取：将番杏(Tetragonia tetragonioides)种子进行消毒处理，将消毒处理后的番杏种子接种于萌发培养基中，培养条件为22～28℃，光照强度为50～60μmol m^-2s^-1，光照12～13h/d，直至长出无菌苗，所述的萌发培养基为：每升含有6-苄氨基嘌呤1.0～3.0mg，其余成份为MS培养基，pH为5.9；

S2、不定芽的诱导：将无菌苗的茎段作为外植体，将外植体进行消毒处理，将消毒处理后的外植体接种于诱导培养基中培养，培养条件为22～28℃，光照强度为50～60μmolm^-2s^-1，光照12～13h/d，直至诱导出不定芽，所述的诱导培养基为：每升含有N-苯基-N′-1，2，3-噻二唑-5-脲0.5～1.0mg或6-苄氨基嘌呤1.0mg，α-萘乙酸0.1mg或吲哚-3-丁酸0.1mg，其余成份为1/2MS培养基，pH为5.9；

S3、继代增殖：将不定芽转入增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养条件为22～28℃，光照强度为50～60μmol m^-2s^-1，光照12～13h/d，继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖，所述的增殖培养基为：每升含有6-苄氨基嘌呤0.5～2.0mg和α-萘乙酸0.1～0.3mg，其余成份为1/2MS培养基，pH为5.9；

S4、生根培养：将继代增殖得到的不定芽转入生根培养基中，培养条件为22～28℃，光照强度为50～60μmol m^-2s^-1，光照12-13h/d，使不定芽生根，长成组培苗，所述的生根培养基为：每升含有吲哚-3-丁酸1.0～2.0mg或α-萘乙酸0.5mg，其余成份为1/2MS培养基，pH为5.9；

S5、组培苗移栽：将组培苗移植到栽培基质中，置于湿润、遮荫的环境下培养，浇水，施肥以满足组培苗生长所需的水分和营养需要，经常规培养后获得栽培苗。