[发明专利]miR-25的靶基因结合序列、重组载体、转化体及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，提供了一种miR‑25的靶基因结合序列、重组载体、转化体及其应用，所述靶基因结合序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组载体包含所述的miR‑25的靶基因结合序列；所述转化体包含所述重组载体；本发明明确了miR‑25靶向ACOX1基因3’UTR序列，所述miR‑25能够与ACOX1基因3’UTR上的结合序列相结合，可显著抑制ACOX1的表达；不仅能够阐明miR‑25对ACOX1基因转录后水平的调控作用，有助于今后开发其抑制药物，更为今后进一步研究miR‑25在家畜肉质性状方面发挥的调控作用打下了基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及miR-25的靶基因结合序列、重组载体、转化体及其应用。

背景技术

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的长度约为22nt的单链非编码RNA小分子，不同的miRNAs在生物系统中的功能是确定的，它们通常结合到mRNAs的3’UTR，导致mRNA被降解或抑制mRNA的翻译，从而负调控基因的表达(Bartel 2004；Carthew and Sontheimer2009；Malan-Muller et al.,2013)。目前，成千上万的miRNAs已经被确认参与很多生物学过程中，比如细胞增殖、分化、发育和新陈代谢(Ning et al.,2014)。

miR-25作为miR-106b-25簇中的一员，参与很多生物学过程。我们前期研究结果表明miR-25在小鼠C2C12细胞中参与能量代谢过程，并且影响细胞内甘油三酯的含量(Zhanget al.,2018)；此外，有文献报道对miR-25在秦川牛成年期不同组织中进行表达谱分析，结果显示miR-25在脂肪组织中显著高表达，且在秦川母牛背部脂肪组织中显著上调，预测miR-25在脂肪形成或脂滴沉积过程中发挥重要功能(孙加节，2015)。

ACOX1是过氧化物酶体脂肪酸β-氧化第一步脱氢反应的限速酶，它主要在过氧化物酶体增殖物中被激活并且氧化中长链的直链脂肪酸(Wang et al.,2014)。已有文献报道ACOX1基因与牛肉质等级和背膘厚紧密相连(Jiao et al.,2011；Lee et al.,2010)；我们前期的研究结果初步表明ACOX1基因能够促进前脂肪细胞的脂肪沉积。

因此，明确miR-25靶向ACOX1基因3’UTR的结合序列，不仅能够阐明miR-25对ACOX1基因转录后水平的调控作用，更为今后进一步研究miR-25在家畜肉质性状方面发挥的调控作用打下基础。而关于这方面的研究，至今未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了miR-25的靶基因结合序列、重组载体、转化体及其应用，明确了miR-25靶向ACOX1基因3’UTR的结合序列，不仅能够阐明miR-25对ACOX1基因转录后水平的调控作用，有助于今后开发其抑制药物，更为今后进一步研究miR-25在家畜肉质性状方面发挥的调控作用打下了基础。

为实现上述目的，本发明是这样实现的：

在本发明的第一方面，提供了一种miR-25的靶基因结合序列，所述靶基因结合序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明的第二方面，提供了一种包含所述的miR-25的靶基因结合序列的重组载体。

在本发明的第三方面，提供了包含所述的重组载体的转化体。

在本发明的第四方面，提供了所述的转化体在筛选miR-25抑制药物中的应用以及所述的转化体在家畜肉质遗传改良中的应用。