[发明专利]基于单细胞水平的早期癌症检测方法

权利要求书

1.一种基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，纳米探头尖端二氧化硅表面在APTES乙醇溶液中进行硅烷化，干燥后在戊二醛溶液中进行活化，然后在乳酸脱氢酶溶液中培养进行固定化；

步骤2，选择人乳腺癌细胞株MCF7作为试验用细胞株，并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；

步骤3，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以细胞密度为1×10⁴个细胞/cm²接种到细胞浴槽的盖玻片上用于细胞附着；

步骤4，细胞附着24h、25h、 26h、27h后，用PBS缓冲液冲洗粘附在盖玻片上的细胞3次，向细胞浴槽中加入100μl、110ul、120ul、130ul的细胞培养液，细胞培养液中添加NAD+溶液；

步骤5，将细胞浴槽放入纳米光电生化检测仪，在倒置荧光生物显微镜下调整纳米探头靠近细胞膜，检测并记录反应过程中释放的NADH荧光光子数。

2.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤1中，所述APTES乙醇溶液浓度为5%。

3.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤1中，所述戊二醛溶液浓度为5%。

4.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤1中，所述乳酸脱氢酶溶液浓度为2mg/ml、1.8mg/ml、1.6mg/ml、1.5mg/ml。

5.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤2中，先将试验用细胞株用PBS缓冲液清洗，清洗后用0.25%的胰蛋白酶溶液消化细胞，细胞消化后用含血清的培养基终止消化，将混悬液吸到离心管中，1000r/min离心5min，得到的沉淀物用含血清的培养基重悬吹匀即可。

6.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤3中，所述细胞浴槽的盖玻片为细胞可爬壁生长的盖玻片。

7.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤4中，所述添加NAD+溶液的终浓度为1.5mM。

8.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤5中，所述纳米探头通过微操作系统进行控制移动。

9.根据权利要求1所述的基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：步骤5中，所述NADH的激发波长为360nm，发射波长为460nm。