[发明专利]一种快速检测遗传性皮肤抗氧化基因的方法

说明书

本发明为一种快速检测遗传性皮肤抗氧化基因的方法，涉及分子生物学领域。本发明涉及检测五个基因的五个SNP位点，提供五个待检测位点的检测用特异性引物及其反应条件(详见表1～3)。本发明采用高分辨率熔解曲线分析技术(High Resolution Melting，HRM)以分析待检测样本的各SNP位点基因型。为辅助分析待检测样品的基因型，本发明还将提供各SNP位点对应标准基因型模板(含野生型、突变杂合型及突变型)。

技术领域

本发明为一种快速检测遗传性皮肤抗氧化基因的方法，涉及分子生物学领域，尤其针对美肤行业肤质评测。

背景技术

目前，常用的基因检测方法为测序法、基因芯片法、飞行质谱法，这些方法都需要在完成PCR扩增后进行后续实验分析，实验周期相对较长，适用于中、高通量的SNP检测。使用支持高分辨率熔解曲线分析技术(High Resolution Melting，HRM)的仪器仅需要一次PCR扩增后即可根据扩增产物直接进行分析报告得出样品的基因型，极大的缩短了实验时长。

HRM是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术，具有极高的敏感性，可以检测出单个碱基的差异，并且成本低、通量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限，实现了真正的闭管操作。

HRM无需使用序列特异性探针，而是利用一种饱和染料对PCR反应产物进行分析。基本原理：双链核苷酸(double strand DNA，dsDNA)的热稳定性受其长度和碱基组成的影响，序列变化会导致升温过程中dsDNA解链行为的改变。因为所用的荧光染料只能嵌入并结合到dsDNA上，因此利用实时PCR技术，通过实时检测dsDNA熔解过程中荧光信号值的变化，就能以生成不同形状熔解曲线的方式将PCR产物中存在的差异直观地展示出来。同时，借助于专业性的分析软件就可以对测试群体实现基于不同形状熔解曲线的基因分型或归类。

氧化是肌肤衰老的最大威胁，饮食不健康，日晒、压力、环境污染等都能让肌肤自由基泛滥，从而产生面色黯淡、缺水等氧化现象，都是身体产生氧化的“罪魁祸首”。所以无论从健康层面还是从护肤层面，我们都需要在日常生活中注意抗氧化。抗氧化能力的强弱主要由我们熟知的超氧化物歧化酶(SOD)的含量及活性所决定，它是是体内重要的内源性抗氧化酶之一，它在胞浆内合成，移至线粒体发挥作用，是人体内一种重要的超氧化物歧化酶。我们可检测包含SOD在内的多种编码氧化酶的基因来评定您的皮肤综合抗氧化能力。

Catalase(CAT)，该基因编码过氧化氢酶，过氧化氢酶是一种血红素酶，存在于几乎所有需氧细胞的过氧化物酶体中，是人体防御氧化应激的关键抗氧化酶。过氧化氧酶将活性氧过氧化氧转化为水和氧，从而减轻过氧化氢的毒性作用。

nuclear factor，erythroid 2like 2(NFE2L2)，该基因编码转录因子，该转录因子是碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白的小家族的成员。编码的转录因子还可调节其启动子中含有抗氧化反应元件(ARE)的基因；并可编码参与对损伤和炎症反应的蛋白质，包括产生自由基。

NAD(P)H quinone dehydrogenase 1(NQO1)，该基因是NAD(P)H脱氢酶(醌)家族的成员，编码细胞质2-电子还原酶。这种FAD结合蛋白可形成同源二聚体并将醌还原为氧醌。其酶活性还可防止醌的一个电子还原，从而导致自由基的产生。