[发明专利]一种检测犬巴贝斯虫试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开一种犬巴贝斯虫病检测试剂盒及非疾病诊断方法。本发明的检测犬巴贝斯虫试剂盒中至少包括有序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的两条扩增引物。利用本发明的试剂盒进行检测的方法具有重复性好、灵敏度高、速度快和全封闭反应等优点，检测方法具有特异性好、敏感性高和可重复性的特点，使其能更好地用于犬体内梨形虫的鉴别检测。本方法囊括了国内现存的犬巴贝斯虫病病原，检测范围广，可用于犬巴贝斯虫种的鉴别检测和流行病学调查。

技术领域

本发明涉及一种脊椎动物寄生虫的试剂盒及其非疾病检测方法，确切讲本发明涉及一种犬巴贝斯虫病检测试剂盒及非疾病诊断方法。

背景技术

巴贝斯虫病是一种蜱传性的血液原虫病，该病由寄生于红细胞内的多种巴贝斯虫引起，其临床特征为发热、精神沉郁、嗜睡、黄疸、贫血、血红蛋白尿、呕吐、呼吸困难等，对犬的健康造成了巨大的危害。到目前为止，导致犬巴贝斯虫病的病原主要有6种，根据虫体形态特征可分为大巴贝斯虫和小巴贝斯虫（Laia et al, 2016）。大巴贝斯虫有3种，分别是：韦氏巴贝斯虫（Babesia canis vogeli）、犬巴贝斯虫（Babesia canis）和罗氏巴贝斯虫（Babesia canis rossi）。小巴贝斯虫有：吉氏巴贝斯虫（Babesia gibsoni）、康氏巴贝斯虫（Babesia conradae）和vulpes巴贝斯虫（Babesia vulpes）。

我国对犬巴贝斯虫病的报道最早在1985的河南，随后在江苏、江西、浙江、安徽、河南、陕西、辽宁、山东等地均有报道(吕文祥等，1989；陈启军等，1993；刘跃生，2002；Chen etal, 2014; Xu et al, 2015; Zhang et al, 2016; He et al, 2017; Wang et al,2018)。流行病学调查结果显示，在我国流行的巴贝斯虫病病原主要有犬巴贝斯虫（Babesia canis canis）、罗氏巴贝斯虫（Babesia canis rossi）、韦氏巴贝斯虫（Babesia canis vogeli）、吉氏巴贝斯虫（Babesia gibsoni）和康氏巴贝斯虫（Babesia conradae）（He etal, 2017；Wang et al, 2018）。近年来我国犬的数量呈现逐年上升的趋势，截至2012年我国宠物犬数量已达1.3亿只。利用血清学和分子生物学技术对犬巴贝斯虫的流行病学调查结果显示，该病流行范围广，其阳性率为2.47%-11.86%（Xu et al，2015；Zhang et al，2017；Wang et al，2018）。进行犬巴贝斯虫的研究，对养犬业和公共卫生有重要的意义，对巴贝斯虫的鉴别检测也是寄生虫学研究的重要内容，有益于针对性地预防和控制犬巴贝斯虫病。

对感染犬的五种巴贝斯虫进行大小群体（区分大巴贝斯虫和小巴贝斯虫）的形态鉴定相对容易，然而要进行虫种的鉴别十分困难，也存在一定的局限性。随着现代分子生物学技术的发展，国内外学者应用PCR、实时荧光定量PCR（Real-time PCR）、反向线状印迹技术（RLB）等对犬巴贝斯虫进行检测。这些方法敏感性和特异性均较高，但每次只能鉴定出一种病原体，无法同时实现多种病原的鉴别检测。

发明内容

本发明提供一种可克服现有技术不足的用于检测犬巴贝斯虫试剂盒，以及利用这种试剂盒进行非疾病检测目的的检测方法。

本发明的检测犬巴贝斯虫试剂盒中至少包括有序列为SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2的两条扩增引物。