[发明专利]碳水化合物结合模块及其在固定化酶制备与融合蛋白纯化上的应用

权利要求书

1.一种蛋白质，其特征在于，所述蛋白质是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质，或者由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的蛋白质。

2.一种碳水化合物结合模块，其特征在于，其为权利要求1所述蛋白质。

3.编码如权利要求2所述碳水化合物结合模块的基因。

4.根据权利要求3所述基因，其特征在于，所述基因是SEQ ID NO：2所示的DNA分子，或者SEQ ID NO：2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变。

5.含有权利要求3或4所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞或重组菌。

6.一种固定化酶的制备方法，其特征在于，将编码所述碳水化合物结合模块的基因与目的蛋白基因进行融合表达，形成融合蛋白，利用多糖固定化载体将所述融合蛋白一步纯化并固定化，得到固定化酶。

7.根权利要求6所述一种固定化酶的制备方法，其特征在于，所述多糖固定化载体选自以下物质中的一种或两种及两种以上的混合物：酵母葡聚糖、昆布多糖、可得然多糖、纤维素、β-葡聚糖或几丁质。

8.一种含有所述碳水化合物结合模块作为标签的融合蛋白的构建方法，该方法为：

a)将SEQ ID NO：2所示的DNA分子通过重叠PCR方法与目的蛋白DNA分子连接并导入重组质粒；或，

b)通过限制性内切酶将SEQ ID NO：2所示的DNA分子与目的蛋白DNA分子构建在同一重组质粒中，将重组质粒导入宿主菌中得到的重组菌，诱导培养上述重组菌，得到重组融合蛋白。

9.一种重组融合蛋白质纯化方法，其特征在于，所述重组融合蛋白质纯化方法为：

a)在碳水化合物结合模块和目的蛋白的连接肽上加入酶切位点；

b)通过限制性内切酶将SEQ ID NO：2所示的DNA分子与目的蛋白DNA分子构建在同一重组质粒中，并进行异源表达；

c)利用多糖纯化填料吸附异源表达所得蛋白混合溶液中的目标融合蛋白；

d)通过相应的特异性蛋白酶酶切洗脱得到纯化的重组蛋白。

10.根据权利要求9所述一种重组融合蛋白质纯化方法，其特征在于，所述多糖纯化填料选自以下物质中的一种或两种及两种以上的混合物：酵母葡聚糖、昆布多糖、可得然多糖、纤维素、β-葡聚糖或几丁质。