[发明专利]一种花生AhWRKY75基因及其在提高花生耐盐性中的应用

说明书

本发明公开了一种花生AhWRKY75基因及其在提高花生耐盐性中的应用，该基因编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列或编码由SEQ ID NO.2衍生的并且具有与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列相同的功能的氨基酸序列。将该基因连接到Super1300质粒上构建植物过表达载体Super1300‑AhWRKY75，并通过花粉管注射法转化花生。转基因植株中AhWRKY75基因的表达量是非转基因对照植株“花育23(HY23)”的14～21倍。转入的AhWRKY75基因的过量表达，提高了转基因花生植株的耐盐性。本发明将为花生基因工程耐盐育种提供新的基因源和耐盐新种质，具有重要的理论意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种花生AhWRKY75基因及其在提高花生耐盐性中的应用。

背景技术

花生是我国重要的油料作物和经济作物，在农业乃至整个国民经济中均具有重要地位。我国土地盐碱化形势十分严峻，培育耐盐作物品种是利用盐渍土壤最为经济有效的途径。花生属中等耐盐植物，可在含盐率0.3％的土壤中生长发育，但是产量受到明显抑制。随着生物技术的发展，利用基因工程技术克隆相关耐盐基因导入花生，通过过量表达外源基因提高其耐盐性，是当今提高花生耐盐性及提高盐碱地利用效率的有效策略。

WRKY是高等植物所特有的一类转录因子，因其N-末端含有高度保守的WRKYGQK序列而得名。在植物受到外界胁迫时，WRKY表达水平会发生变化，并引发信号级联反应，以提高植物的胁迫耐受性。如在拟南芥中， AtWRKY25和AtWRKY33任一基因的过表达都会提高转基因植物的耐盐性。过表达菊花的DgWRKY1或DgWRKY3基因的转基因菊花及转基因烟草，耐盐性均有所提高。过表达OsWRKY45和OsWRKY72的转基因水稻对干旱和盐胁迫的耐受性也大大增加。

前期研究中从花生耐盐突变体中筛选获得盐胁迫条件下表达量显著升高的c26767-g2基因，通过在线http://peanutgr.fafu.edu.cn/序列比对获得花生栽培种相应基因序列AHA06G2420.1，并在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 进行序列比对和进化树分析，该基因编码蛋白序列与拟南芥AtWRKY75基因编码蛋白序列同源性最高(64.14％)，因此将该基因命名为AhWRKY75 (郭悦.花生AhWRKY75基因的克隆、遗传转化及功能分析(硕士论文).青岛农业大学,2018)。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种花生AhWRKY75基因及其在提高花生耐盐性中的应用，本发明在花生中克隆AhWRKY75基因的全长cDNA序列，并构建过量表达载体转化花生，研究AhWRKY75基因在转基因花生中的表达模式，筛选出过量表达且耐盐性显著提高的转基因花生株系。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种花生AhWRKY75基因，其编码SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列或编码由SEQ ID NO.2衍生的并且具有与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列相同的功能的氨基酸序列。

可选地，其选自下述核苷酸序列：

1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；或

2)与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列具有80％以上一致性，且编码与 SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列的核苷酸序列。

本发明还公开了一种含有上述的花生AhWRKY75基因的重组表达载体。

本发明还公开了一种含有上述的花生AhWRKY75基因的宿主菌，所述宿主菌选自细菌或真菌。

可选地，所述宿主菌选自大肠杆菌、农杆菌或酵母菌。

本发明还公开了一种由上述的花生AhWRKY75基因编码的氨基酸序列。

可选地，其为SEQ ID NO.2。