[发明专利]抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

说明书

本发明涉及杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体，所述抗体能与人IgG特异性结合。本发明还涉及包括所述杂交瘤细胞株或单克隆抗体的试剂盒。本发明的单克隆抗体在抗体纯度、可重复性、抗体效价和稳定性方面均展现出很好的性能。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人IgG的单克隆抗体，分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及所述单克隆抗体的应用。

背景技术

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)，是一类有包膜、基因组为双链DNA的病毒，广泛存在于自然界中，能感染人和许多动物，尤其对人体皮肤组织具有较强的嗜性，是皮肤病和性病的常见病原体。单纯疱疹病毒有两个血清型，包括：单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1，HSV-1)，单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus-2，HSV-2)。HSV-1和HSV-2引起的生殖器疱疹已造成越来越严重的社会和公共卫生问题。

目前检测单纯疱疹病毒常用的实验室方法有直接免疫荧光或组化染色、病毒分离培养、抗原乳胶凝集实验、血清抗体检测以及PCR技术。上述方法各有优势和不足。免疫荧光染色或免疫组化染色是直接检测细胞内的HSV特异性抗原，可做为确诊性实验。不过病损皮肤粘膜的脱落细胞采集环节比较困难，降低了灵敏度。病毒分离培养是HSV感染实验室最敏感的诊断方法，可对HSV病毒分离株进行分型。但细胞培养费时、费事，限制了在临床检验中的应用。抗原乳胶凝集试验是利用特异性的单克隆抗体与乳胶分子颗粒结合成复合物，当血清中有HSV抗原存在时，就会形成抗原－抗体－胶乳聚合物，出现肉眼可见的凝集现象。该方法优点是不需要特殊仪器，操作简便快速，适用于大批量标本的筛查。不过敏感性差，检出率只有50％。PCR技术检测灵敏度高，可检测到小至3个PFU的病毒量，已初步显出在临床病毒检验中的优越性。但是PCR方法灵敏度高，操作技术要求高，易污染而致假阳性，还需要人才技术培训、特殊仪器和进口试剂，目前在普及和推广方面仍有困难。检测HSV血清学抗体仍是临床上最常用的判断HSV感染的方法，目前HSV特异性抗体主要有IgG和IgM两类。血清中HSV–IgG浓度较高，检测准确度较高。因此研发出经系统性评价结果较好的抗人IgG单克隆抗体在体外诊断试剂领域具有非常广泛的应用。

然而，筛选用于制备体外诊断试剂的单克隆抗体是一个复杂的过程，首先要获得很好的抗原，来制备足够多的抗体，然后对抗体进行系统的评价，获得具有临床相关性的候选抗体，再开发成检测试剂。其中，抗体效价、交叉反应性、稳定性等均是重要的评价因素，如抗体效价高低反映了一定浓度下与抗原反应的最低滴度，滴度越低效价越高；抗体交叉反应性可影响该抗体的特异性；抗体的稳定性会直接影响最终结果的可靠性，而稳定性较差的抗体对保存条件、操作条件要求更高，从而降低了其作为诊断试剂的实用性及结果的可靠性，并不可避免地引起成本的上升；临床试验则用来说明抗体在诊断相应疾病或病毒感染时的实际效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗人IgG单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株、含上述单克隆抗体或杂交瘤细胞株的试剂盒以及它们在检测人IgG中的用途。通过系统性评价，所述抗体在各方面均有较佳表现，从而适合作为免疫诊断试剂用于制备体外诊断试剂盒。

为此，本发明人进行了大量研究，通过人IgG来免疫小鼠，细胞融合后经有限稀释法克隆至少4次，直到达到单克隆，从得到的众多克隆中筛选到1株能稳定分泌抗体的新型杂交瘤细胞株(Hybridoma)，此杂交瘤细胞株记作杂交瘤细胞株6B5，并于2018年8月23日将其保藏于中国典型培养物保藏中心，中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2018173，从而完成了本发明。

在第一个方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2018173。

在第二个方面，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与人IgG特异性结合。