[发明专利]用于鉴别16种猪病病原冻干微芯片、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于鉴别16种猪病病原冻干微芯片、试剂盒及方法，所述试剂盒包括一个冻干微芯片、一瓶矿物油、一管稀释液及一管无核酸酶水，所述冻干微芯片包被有引物、探针、Taq酶、反转录酶、海藻糖、Tris‑Cl、dNTP、Mgsupgt;2+/supgt;。冻干条件为：预冻阶段，隔板温度下降到‑55℃，预冻时保持时间为1h，然后设备进行抽真空，保持冷冻干燥1h；解析干燥阶段，再将隔板温度升至‑25℃保持1h，然后将隔板温度升至37℃并保持2h，最后将隔板降至25℃并保持1h，得到冻干微芯片，使用时加入稀释液和样本核酸即可。本发明同时检测16种猪病病原，所述检测试剂盒检测方法准确性、特异性和敏感性高，检测时间短。

技术领域

本发明涉及病毒的分子生物学检测技术领域，特别是涉及一种用于鉴别16种猪病病原冻干微芯片、试剂盒及方法。

背景技术

我国是农业畜牧业大国，猪类养殖以规模化集约化养殖为主，高密度的养殖方式也使得猪类的传染性疾病难以预防，且问题日益显著。而且多种病原同时感染，导致检测及预防疾病发生也十分困难。

猪类常见的传染性疾病病原有猪口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TEGV)、猪冠状病毒(Porcine coronavirus,DCV)、猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,MHP)、猪轮状病毒(Porcine rotavirus，PRTV)、猪瘟病毒(Classicalswine fever virus，CSFV)、猪流感病毒(Swine Influenza virus，SIV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)、猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus，PRV)、猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)、猪链球菌(Streptococcus suis，SS)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)、猪衣原体(Swine Chlamydiosis,SC)。近年来，虽然各国科学家已对猪病及各类病原进行了多方面的研究。目前对猪病病原的检测所采用的方法我国在近几年时间内相继建立了病原的分离纯化培养鉴定、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)等血清学检测技术以及分子检测技术(RT-PCR)。病毒分离操作烦琐，耗时长，漏检率高；ELISA方法相对简便，快速，但对于微量或杂质较多的样品，其特异性和灵敏度较低，可能造成漏诊或误诊。PCR作为一种新型的分子生物学技术，自诞生以来，由于其特异性、敏感性高，能在短时间内通过基因扩增得到大量的目的片段，克服了传统的猪病原检测技术包括病毒分离鉴定试验周期长的缺点，为猪病原早期快速检测提供了敏感、快速、实用的检测方法，使之成为目前猪病病原检测的重要手段之一。但普通PCR仍存在操作繁琐、检测时间长且易污染等弊端。所以目前市场急需快速、准确、灵敏度高，且便携，能现场操作的同时检测和鉴别上述16种猪病的集成试剂产品。可以为我国猪病的防制提供先进、有效的早期快速检测技术和监测手段的同时，也为猪病防制争取到极为宝贵的快速反应时间。

发明内容

基于本领域的上述需求，本发明的目的在于提供一种用于鉴别16种猪病病原冻干微芯片及试剂盒，使其能够快速、有效地对猪病病原进行检测，准确性、特异性和敏感性高，重复性好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

用于鉴别16种猪病病原冻干微芯片，其特征在于，用于鉴别16种猪病病原的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；

所述荧光PCR反应液包括：下述引物和探针：

FMDV-F:5’-GGCCGAGACCACAAATGTG-3’；