[发明专利]一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂及其制备方法。本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其包含植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母，在对虾肠道内定植，有利于调控对虾肠道及水体微生物的菌群结构，拮抗致病弧菌，还能提高饲料消化利用率，提高对虾非特性免疫力，解决当前对虾养殖所面临的对虾弧菌病频发、养殖成活率低、养殖效益低等问题，满足对虾养殖可持续发展的迫切需要。

技术领域：

本发明属于微生物领域，具体涉及一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂及其制备方法。

背景技术：

对虾养殖业已经形成完整的产业体系，随着养殖密度和规模不断扩大，各种疾病频繁发生，由弧菌属引起的细菌性疾病，传播快、传染率高，给对虾养殖业造成了巨大的经济损失，目前已严重制约了我国乃至全世界对虾养殖的发展。养殖者通常大量使用抗生素药物，虽然短期内取得了成效，但随之导致病原微生物耐药性增强、微生物群落多样性下降、药物残留、养殖环境恶化等问题。研究开发安全高效对虾病害生态防治及养殖技术显得尤为重要。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术中的缺陷，提供一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂及其制备方法。本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂能拮抗致病弧菌，提高对虾养殖成活率和效益，解决当前对虾养殖所面临的病害高发、成活率低等问题，满足对虾养殖可持续发展的迫切需要，促进对虾养殖业的健康可持续发展。

本发明的第一个目的是提供一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：将凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂和酿酒酵母液体菌剂按体积比为4-6:2-3:1-3混合，得到拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂；所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×10⁹cfu/mL，所述的植物乳杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×10⁹cfu/mL，所述的酿酒酵母液体菌剂的活菌数≥5.0×10⁹cfu/mL。

优选，所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：

(1)将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646活化后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃培养16-20h，形成摇瓶液体菌种；

(2)将摇瓶液体菌种以体积分数3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率200-300rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；

(3)将一级种子液以体积分数2％-4％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率150-200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间36-48h，当芽孢率大于80％时结束发酵，由此制备得到凝结芽孢杆菌液体菌剂；

所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；

所述的二级发酵培养基为：每升含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2。

优选，所述的植物乳杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：

(1)将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140活化后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养20-30h，形成三角瓶液体菌种；

(2)将三角瓶液体菌种以体积分数3％-6％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；