[发明专利]一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用

权利要求书

1.拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂作为拮抗对虾弧菌的饲料添加剂的应用，所述的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂是通过以下方法制备的：将凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂和酿酒酵母液体菌剂按体积比为4-6:2-3:1-3混合，得到拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂；所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×10⁹cfu/mL，所述的植物乳杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×10⁹cfu/mL，所述的酿酒酵母液体菌剂的活菌数≥5.0×10⁹cfu/mL。

2.根据权利要求1所述的应用，所述的饲料添加剂为提高对虾成活率和非特异性免疫性、有效抑制对虾肠道内弧菌数量的饲料添加剂。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：

(1)将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646活化后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃培养16-20h，形成摇瓶液体菌种；

(2)将摇瓶液体菌种以3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率200-300rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；

(3)将一级种子液以2％-4％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率150-200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间36-48h，当芽孢率大于80％时结束发酵，由此制备得到凝结芽孢杆菌液体菌剂；

所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；

所述的二级发酵培养基为：每升含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的植物乳杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：

(1)将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140活化后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养20-30h，形成三角瓶液体菌种；

(2)将三角瓶液体菌种以3％-6％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；

(3)将一级种子液以8％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，结束发酵，由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂；

所述的一级发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；

所述的二级发酵培养基为：每升含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8。