[发明专利]利用向日葵、蓖麻接种枯草芽孢杆菌修复Cu、Pb、As污染土壤的方法

权利要求书

1.利用向日葵、蓖麻接种枯草芽孢杆菌修复Cu、Pb、As污染土壤的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）菌悬液制备：将枯草芽孢杆菌转接到LB液体培养基中，在（29±1）℃下摇床培养24h后，在冷冻离心机上8000r/min离心10min，弃上清液，用灭菌的磷酸盐缓冲液冲洗菌体两次，最后将菌体溶解在无菌水中，即为备用的菌悬液；

（2）种子接菌：选取饱满的蓖麻和向日葵种子，先用1%的NaClO浸泡20min表面消毒，再用无菌水冲洗后将其置于浓度为10⁹CFU/mL菌悬液中包衣30min；

（3）土壤预处理：对待修复的土壤翻整，浇水，施肥；

（4）栽培：待上述包衣的蓖麻种子和向日葵种子阴干后，播种在污染土壤中，两种植物实行混种，株距0.5~1.0m；

（5）管理：当苗高10cm时进行间苗，拔除生长过密的细弱幼苗，并结合中耕除草一次，在苗高17~20cm时即可定苗，并进行第二次中耕除草，在开花前进行第三次中耕除草，当苗高30cm时，结合中耕进行培土壅蔸，固定根部；

（6）移除及后续处理：一段时间后移除所有蓖麻与向日葵，对移除的植株进行无公害处理，提取其中的Cu、Pb、As元素；

其中，所述步骤（1）中LB液体培养基的组成为：胰蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 5g/L，用NaOH调整pH为7；

所述步骤（4）中蓖麻种子和向日葵种子先在温度为25℃、相对湿度为65%的沙土中萌发，待幼苗出土长出3~4片真叶时，带泥移栽到污染土壤中，移栽后每隔3~5天浇水一次，到成活为止；

所述步骤（2）菌悬液中添加有新高脂膜、磷酸二氢钾、尿素混合溶液。

2.如权利要求1所述利用向日葵、蓖麻接种枯草芽孢杆菌修复Cu、Pb、As污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤（5）管理过程中蓖麻定期施加氮肥，开花后改施磷肥。

3.如权利要求1所述利用向日葵、蓖麻接种枯草芽孢杆菌修复Cu、Pb、As污染土壤的方法，其特征在于，所述步骤（6）还包括在移除前两周在土壤里施加螯合剂。

4.如权利要求1所述利用向日葵、蓖麻接种枯草芽孢杆菌修复Cu、Pb、As污染土壤的方法，其特征在于，当出现Cu浓度超过800mg/kg，Pb浓度超过1600mg/kg，As浓度超过400mg/kg情况之一时，在所述修复Cu、Pb、As污染土壤的方法前对污染土壤进行淋洗预处理。