[发明专利]一种用于扩增日本鳗鲡干扰素相关因子的引物和制备方法在审
| 申请号： | 201811049120.5 | 申请日： | 2018-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN110129329A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 梁英;李想;黄文树;黄贝;徐继松;翟少伟 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12N15/23 | 分类号： | C12N15/23;C12N15/11;C12N15/70;C07K14/57;C07K1/22 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 秦华 |
| 地址： | 361000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鳗鲡 引物 干扰素 扩增 制备 原核表达载体 大肠杆菌 纯化条件 基因序列 诱导条件 重组蛋白 高纯度 构建 镍柱 优化 蛋白 转化 | ||
1.一种用于扩增日本鳗鲡干扰素相关因子的引物，其特征在于，所述引物如SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示。
2.一种制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，使用了权利要求1所述的引物。
3.如权利要求2所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，包括如下步骤：
PCR扩增日本鳗鲡干扰素相关因子：采用权利要求1所述的引物对；
重组质粒pET32a-IFN-γrel的构建：将所得去掉信号肽的日本鳗鲡干扰素相关因子开放阅读框ORF与表达载体pET32a重组得到重组质粒pET32a-IFN-γrel；
原核表达载体诱导表达；
目的蛋白的变复性处理；
纯化得到IFN-γrel重组蛋白。
4.如权利要求3所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，所述PCR扩增日本鳗鲡干扰素相关因子步骤中的PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min。
5.如权利要求3所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，所述原核表达载体诱导表达步骤的诱导表达条件为加入IPTG终浓度为1.0mmol/L，在37℃诱导温度下，对IFN-γrel蛋白表达工程菌诱导2-6h；优选的，诱导6h。
6.如权利要求3所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，所述目的蛋白的变复性处理步骤为采用尿素。
7.如权利要求3所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，所述纯化步骤采用HisPurTMNi-NTA Spin Columns。
8.如权利要求7所述制备日本鳗鲡干扰素相关因子的方法，其特征在于，所述纯化步骤中，纯化使用的缓冲液的pH值为8.0，NaCl浓度为300mM。
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