[发明专利]羊肉中鸡源成分的检测引物、检测试剂盒及应用与检测方法

权利要求书

1.羊肉中鸡源成分的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括检测羊肉成分的第一引物对和第一探针，以及检测鸡源成分的第二引物对和第二探针；所述第一引物对的碱基序列如SEQ ID NO.1-2所示，所述第一探针的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述第二引物对的碱基序列如SEQ ID NO.4-5所示，所述第一探针的碱基序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的羊肉中鸡源成分的检测引物，其特征在于，所述第一探针和所述第二探针的5’端包括第一荧光基团，3’端包括第二荧光基团，所述第一荧光基团和所述第二荧光基团不相同，所述第一荧光基团为FAM、MGB、VIC、TET、BHQ1、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、Texas Red、RED670或NED中的一种，所述第二荧光基团为FAM、MGB、VIC、TET、BHQ1、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中的一种。

3.如权利要求1或2所述的羊肉中鸡源成分的检测引物在检测羊肉中鸡源成分中的应用。

4.如权利要求1或2所述的羊肉中鸡源成分的检测引物在制备检测羊肉中鸡源成分的试剂盒中的应用。

5.一种羊肉中鸡源成分的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求1或2所述的羊肉中鸡源成分的检测引物。

6.根据权利要求5所述的羊肉中鸡源成分的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括基因组DNA提取试剂、ddPCR反应试剂和荧光定量PCR反应试剂。

7.根据权利要求6所述的羊肉中鸡源成分的检测试剂盒，其特征在于，所述基因组DNA提取试剂为PBS缓冲液、蛋白酶K、组织消化液GHA以及TB溶液中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的羊肉中鸡源成分的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应试剂包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺中的至少一种，所述ddPCR反应试剂包括TMSupermix forprobes试剂。

9.一种羊肉中鸡源成分的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

取鸡肉和羊肉样品分别提取基因组DNA，进行ddPCR和荧光定量PCR，确定所述鸡肉样品和所述羊肉样品的基因拷贝数和Ct值的线性关系；

定量取样所述鸡肉样品和所述羊肉样品，并分别提取的基因组DNA，进行ddPCR试验，获得所述鸡肉样品和所述羊肉样品质量与基因拷贝数的线性关系；

通过基因拷贝数和Ct值的线性关系以及质量与基因拷贝数的线性关系，获得所述鸡肉样品和所述羊肉样品质量与Ct值的关系，并得到鸡肉与羊肉质量百分比关系；

取待检样本并提取基因组DNA，进行荧光定量PCR试验，获得所述待检样本的Ct值，通过所述鸡肉样品和所述羊肉样品质量与Ct值的关系，计算得到所述待检样本鸡肉含量的百分比。

10.根据权利要求9所述的羊肉中鸡源成分的检测方法，其特征在于，所述ddPCR反应程序为：95℃预变性10min，94℃变性30s，60℃退火1min，45个循环，98℃固化微滴10min；

所述羊肉样品的荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s，59-62℃退火34s，45个循环；

所述鸡肉样品的荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s，54-56℃退火34s，45个循环。