[发明专利]一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒及其应用，所述的检测试剂盒内包括一对PNPLA6基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：其中上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示，优点是该诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对颅内动脉瘤的检测，检测效率高，针对性强，同时，以PNPLA6基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为颅内动脉瘤辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。

技术领域

本发明涉及颅内动脉瘤的辅助诊断技术领域，特别涉及一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒及其应用，尤其指一种能用于检测与颅内动脉瘤相关的PNPLA6基因甲基化程度的试剂盒及其应用。

背景技术

颅内动脉瘤(Intracranial aneurysms, IA)是指颅内动脉内腔局限性异常膨胀导致血管壁形成一种突出的瘤状，是蛛网膜下腔出血的首要原因。IA破裂引发的脑出血在脑血管意外病例中位列第三，仅次于脑血栓和高血压脑出血，并且具有较高的致残率和死亡率。患者被确诊为IA后，采取保守治疗，约70%病人会死于动脉瘤再出血。而动脉瘤第一次破裂，死亡率高达40%，其中半数在发病后48小时内死亡。即使幸存下来，也有1/3可发生再次出血，发生再次出血者的死亡率高达70-80%。IA患者在破裂出血之前，90%的病人都没有明显的症状和体征，具有极高的潜伏性，给人们生活带来巨大的危险。手术后患者也可能留下不同程度的残疾和后遗症，给患者家庭和社会带来沉重的负担。IA的发病原因尚不十分清楚。目前，研究认为IA的发生、形成是一个复杂的多基因，多生物因子共同作用的过程。其致病机理包括遗传基因、脑血流动力学、血管生长情况、生活环境(吸烟，酗酒)等诸多因素。随着医学发展，研究者们都逐渐倾向于IA的基因和生物因子方面的研究。

神经靶脂酶(Patatin-like phospholipase domain-containing protein 6,PNPLA6)是一种磷脂酶，它使细胞内的磷脂酰胆碱去乙酰化，产生甘油磷脂酰胆碱。PNPLA6主要位于细胞质内质网的表面，并且集中在脑部神经元，胎盘和肾脏中。脑部PNPLA6含量的平衡有着重要的作用，其活性丧失将导致大脑中磷脂酰胆碱水平异常升高和神经元中分泌途径的损害。目前基因功能的研究发现，沉默PNPLA6基因的表达后会引起一系列功能通路的改变，最终导致脑部神经和血管系统的病变。目前，国内外还没有公开任何关于颅内动脉瘤与PNPLA6基因甲基化相关的研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测效率高，针对性强的一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒及其应用，其中PNPLA6基因甲基化水平与颅内动脉瘤的患病率呈正相关。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒，所述的检测试剂盒内包括一对PNPLA6基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：

甲基化特异性上游引物的核苷酸序列：

5’- Biotin - GGATTTGGGGGTGGTTAGA -3’；

甲基化特异性下游引物的核苷酸序列：

5’- TACTCCCCCACCAACTCCTTCT -3’；

甲基化特异性测序引物的核苷酸序列：

5’- ACCAACTCCTTCTTAC -3’。