[发明专利]一种线性pH梯度缓冲液及其应用

说明书

本发明公开了一种线性pH梯度缓冲液及其应用，线性pH梯度缓冲液包括第一缓冲液和第二缓冲液；第一缓冲液为pH≤3的缓冲液，其包括负一价的酸根离子；第二缓冲液为pH≥8的缓冲液，其包括负二价的酸根离子、负三价的酸根离子和正一价的阳离子；pH梯度缓冲液的应用为进行蛋白分离纯化时，以第一缓冲液和第二缓冲液的混合液作为洗脱溶液；线性pH梯度缓冲液中的第一缓冲液和第二缓冲液混合时，可以得到pH呈线性梯度变化的缓冲液，并且该溶液含有的盐远远少于盐缓冲溶液，在生产应用的时候，可以省去除盐的步骤，节约成本。

技术领域

本发明涉及一种线性pH梯度缓冲液及其应用，属于缓冲试剂技术领域。

背景技术

生物制药(包括以蛋白为基础的治疗药物和单克隆抗体mAbs)下游的提纯，例如蛋白的分离纯化，目前普遍采用离子交换层析法(IEC)，以盐缓冲溶液作为流动相来使药用蛋白质从潜在的污染物中分离：根据蛋白质的电荷，选取亲和填料(介质)，以盐缓冲溶液作为流动相进行离子交换，这样的下游层析方法是现在行业的主流工艺。但是，由于进行蛋白分离特别是单克隆抗体蛋白分离纯化中，亲和填料普遍使用美国General Electric公司生产的亲和填料，亲和填料纯化原理主要是根据蛋白与配基之间的特异性结合的原理，将能与蛋白特异性结合的配基交联到填料上，就可以纯化特定的蛋白，亲和填料由于选择单一，因此成本较高。并且，普通的酸碱溶液混合为在弱酸性溶液中加入弱碱，p H值从5到8.5会发生跳变，只会得到一个S形曲线，如图1所示。pH值的突然急剧上升，经常导致蛋白质和与之密切相关的电荷相近的杂质同时在IEC柱上洗脫出来，无法达到以分离为目的的生产和质量检测。同时，采用盐分离出的目标蛋白质需要除去大量的来自盐缓冲溶液中的盐成分，才能再进行下一道工序，浪费时间也增加生产成本。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种线性pH梯度缓冲液，第一缓冲液和第二缓冲液混合时，可以得到pH呈线性梯度变化的缓冲液，并且该溶液含有的盐远远少于盐缓冲溶液，在生产应用的时候，可以省去除盐的步骤，节约成本。

本发明的第二个目的在于提供上述线性pH梯度缓冲液的应用，可应用于离子交换层析法中作为洗脱液。

实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种线性pH梯度缓冲液，包括第一缓冲液和第二缓冲液；第一缓冲液为pH≤3的缓冲液，其包括负一价的酸根离子；第二缓冲液为pH≥8的缓冲液，其包括负二价的酸根离子、负三价的酸根离子和正一价的阳离子。

进一步地，负一价的酸根离子为H₂PO₄^-(磷酸二氢根离子)。

进一步地，负二价的酸根离子为HPO₄^2-(磷酸氢根离子)；负三价的酸根离子为C₅H₅O₅COO^3-(负三价柠檬酸根离子)；正一价阳离子为Na⁺。

进一步地，第一缓冲液包括磷酸和柠檬酸；磷酸和柠檬酸的摩尔之比为1:(0.5-3)。

进一步地，磷酸和柠檬酸的摩尔之比为1:(1-2)。

进一步地，第二缓冲液包括磷酸氢二钠和柠檬酸三钠；磷酸氢二钠和柠檬酸三钠的摩尔之比为4:(3-5)。

进一步地，磷酸氢二钠和柠檬酸三钠的摩尔之比为4:(3-4)。

进一步地，第一缓冲液包括磷酸二氢钠和柠檬酸；磷酸二氢钠和柠檬酸的摩尔之比为(1-3):2。

进一步地，磷酸二氢钠和柠檬酸的摩尔之比为(1-2):2。

进一步地，第二缓冲液包括磷酸氢二钠和柠檬酸三钠；磷酸氢二钠和柠檬酸三钠的摩尔之比为(1-4):2。