[发明专利]一种检测多环芳烃的类酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测多环芳烃的类酶联免疫试剂盒及其应用，包括一抗芳烃受体AhR、酶标二抗、多环芳烃PAHs标准品溶液、洗涤液、封闭液、显色液、终止液。检测方法包括：采用试剂盒检测并通过标准曲线法确定检测浓度。本发明可以对环境痕量PAHs进行检测；检测特异性强，操作简便，灵敏度高，样品用量少，可用于现场检测。

技术领域

本发明属于类酶联检测领域，特别涉及一种检测多环芳烃的类酶联免疫试剂盒及其应用。

背景技术

多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs)多环芳烃是指分子中含有两个或者两个以上苯环的，以线性、角状和簇状等方式连接而成的性质稳定的化合物。多环芳烃具有超过10000种单体，而其中已发现的400多种多环芳烃及其衍生物可以诱导人体产生癌症。PAHs是一类惰性很强的化合物，在自然环境条件下降解缓慢甚至不分解，因此可以稳定存在并且不断蓄积，可以持久的存在于环境中。同时多环芳烃具有半挥发性，可以以蒸汽形式、借助吸附于颗粒物来实现在大气环境中进行远距离的迁移，从而造成全球环境的极大污染。同时PAHs够通过生物链的富集、皮肤接触以及室内取暖等多种渠道进入体内，而PAHs的高脂溶性使其极易在生物体内，尤其是在脂肪中蓄积富集，进而可长期导致生物体产生不良或毒性反应。

酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是基于抗体与抗原或半抗原之间的高选择性反应，同时利用酶催化作用的高效性，通过酶的催化作用于底物后的显色反应判定结果，是目前应用最为广泛的综合性免疫学检测技术。

Gomes和Samella以苯并[a]芘-6-异氰酸酯作为半抗原制备单克隆抗体,用于分析检测尿液中的苯并[a]芘及其代谢物。张彦峰等以PBA为半抗原制备抗血清，在此基础上建立了测定多环芳烃类物质的酶联免疫测定方法，对10种PAHs与该抗血清的交叉反应进行了研究，结果表明芘和芘丁酸的半抑制浓度值分别为0.132mg/L和0.253mg/L，检出限分别达到0.1mg/L和0.01mg/L。D.Knopp等以苯并[a]芘丁酸(BaPBA)的四类异构体分别作为半抗原用于制备相应的单克隆抗体,以1-苯并[a]芘丁酸为半抗原所建立的酶联免疫方法对苯并[a]芘的检出限达到0.3μg/L,与高效液相分析方法相比较，酶联免疫对大气颗粒物中的PAHs总量的测定结果呈现出较好的相关性。

目前检测环境中多环芳烃的酶联免疫法，需培养单克隆抗体或多克隆抗体，且检验单一多环芳烃。本发明方法涉及的AHR蛋白可在动物肝脏中提取，简单易得，其次该方法可检测环境中多环芳烃总量，为以后建立判定环境中多环芳烃类物质污染程度标准体系提供依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测多环芳烃的类酶联免疫试剂盒及其应用，克服现有技术的多环芳烃的酶联免疫法中，需要培养单克隆抗体或多克隆抗体，单克隆和多克隆抗体培养周期时间较长的技术，且检测单一的缺陷，构建一种芳香烃受体与酶标蒽，即配体与受体反应的类酶联免疫检测方法，本发明中应用一种芳香烃受体蛋白，并建立与受体的免疫检测方法，该受体与配体的结合特异性好，可以对水体痕量PAHs进行检测；操作简便，灵敏度高，样品用量少，便于筛选样品中是否PAHs，并且检测环境中多环芳烃类物质的总量，为以后建立判定环境中多环芳烃类物质污染程度标准体系提供依据。

本发明的一种检测多环芳烃的类酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括一抗芳烃受体AhR、酶标二抗、多环芳烃PAHs标准品溶液、洗涤液、封闭液、显色液、终止液。

所述芳烃受体AhR为：取喂养于含多环芳烃PAHs水中的鲤鱼的肝脏，清洗后吸干水分，然后加入HEDG缓冲液匀浆，离心取上清，得到粗提取的AhR，纯化，得到芳烃受体AhR。

所述肝脏和HEDG缓冲液匀浆的比例为1g:4mL；HEDG缓冲液为25mmol·L^-1Hepes，1mmol·L^-1EDTA，1mmol·L^-1DTT，10％甘油，调pH7.5。