[发明专利]从球等鞭金藻中提取DHA藻油和藻蛋白的工艺

权利要求书

1.从球等鞭金藻中提取DHA藻油和藻蛋白的工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：

步骤1）种子培养：将培养至对数生长期的球等鞭金藻接种到含有种子培养基的种子罐中，培养48h，收集种子液；

步骤2）发酵培养：将种子液接种到含有发酵培养液的反应池中，22-25℃发酵培养，培养至48h时，往发酵培养液中添加花生四烯酸和没食子酸丙酯，继续发酵培养72-96h；所述花生四烯酸的添加量为50-100mg/L；所述没食子酸丙酯的添加量为20-30mg/L；

步骤3）分离粗油脂和藻蛋白：收集藻液，离心收集沉淀，真空干燥，粉碎，然后添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量为1g粉末：3ml氯仿甲醇混合溶液，微波提取60min，然后进行超声提取60min，再离心，收集沉淀和氯仿相，将氯仿相置于氮气中吹干，并且真空干燥，得到粗油脂，将沉淀用两倍重量的水浸泡10min，然后离心收集藻蛋白，干燥即得；

步骤4）纯化油脂：将粗油脂经过阳离子交换树脂进行离子交换，然后加入活性炭，在氮气保护下，脱色，将脱色后的油脂进行过滤，收集滤过液，即得DHA藻油。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：

步骤1）种子培养：将培养至对数生长期的球等鞭金藻接种到含有种子培养基的种子罐中，光照强度5000lux，22-25℃培养，光暗比为18:6，通气速率为0.2-0.3vvm，培养48h，收集种子液；

步骤2）发酵培养：将种子液按照3-5%的接种量接种到含有发酵培养液的反应池中，22-25℃发酵培养，通气速率为0.5-1vvm；发酵培养至48h时，往发酵培养液中添加花生四烯酸和没食子酸丙酯，继续发酵培养72-96h；整个发酵培养过程中通过流加氨水控制pH在7.0-8.0；

步骤3）分离粗油脂和藻蛋白：收集藻液, 4000r/min离心10min，沉淀用蒸馏水清洗3次，50℃真空干燥，将藻细胞粉碎，然后添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量为1g粉末：3ml氯仿甲醇混合溶液，微波提取，微波功率为150W，提取时间为60min，提取温度为50℃，然后进行超声提取，提取温度为60℃，超声功率为300W，提取时间为60min，再进行离心，收集沉淀和氯仿相，将氯仿相置于氮气中吹干，并且真空干燥，得到粗油脂，将沉淀用两倍重量的水浸泡10min，然后离心收集藻蛋白，干燥即得；

步骤4）纯化油脂：将粗油脂经过阳离子交换树脂进行离子交换，然后加入0.5-0.8wt%的活性炭，在氮气保护下，150-200rpm搅拌脱色30-60min，将脱色后的油脂通过500-1000目的过滤膜进行过滤，收集滤过液，即得DHA藻油。

3.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于，所述种子培养基的组分为：硝酸钠1.5g/L，硅酸钠0.5g/L，氯化钠0.3g/L，硫酸铵0.2g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，VB₁ 0.5mg/L，VB₁₂ 0.1mg/L。

4.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于，所述发酵培养液的组分为：硝酸钠2g/L，碳酸钠0.5g/L，氯化铵0.2g/L，氯化钠0.2g/L，硅酸钠0.1g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，氯化铁20mg/L，氯化锰 20mg/L，萘乙酸钠20mg/L，赤霉素10mg/L。

5.根据权利要求2或3所述的工艺，其特征在于，所述氯仿甲醇混合溶液由氯仿与甲醇按照体积比为2:1混合制得。