[发明专利]金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法在审

申请号：	201811031195.0	申请日：	2018-09-05
公开（公告）号：	CN109336966A	公开（公告）日：	2019-02-15
发明（设计）人：	曲文娟;冯依婷;张欣欣;马海乐	申请（专利权）人：	江苏大学
主分类号：	C07K14/78	分类号：	C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	212013 江***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	金枪鱼皮胶原蛋白脉冲超声辅助酶制备胶原蛋白螺旋结构胃蛋白酶酶解操作工艺天然蛋白乙酸溶液脱脂杂蛋白能耗
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【权利要求书】：

1.金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)金枪鱼皮的脱脂脱杂蛋白处理：将经过4℃解冻、清洗、沥干、切碎等一系列处理的金枪鱼皮与乙醚以1:3(mg/mL)的比例浸泡脱脂72h，并更换乙醚溶剂2次，鱼皮的脂肪残留率为0.12％；将脱脂后的鱼皮与0.25M NaOH溶液以1:30(mg/mL)的比例在4℃下脱杂蛋白3h；用蒸馏水充分洗涤至中性，低温干燥，备用；

(2)脉冲超声辅助酶提金枪鱼皮胶原蛋白：将步骤(1)处理后的鱼皮原料以料液比1:200(mg/mL)浸泡于0.5M乙酸溶液中，于冰浴中均质5min，进行脉冲超声处理，其中频率为28kHz，功率为100～400W，占空比为10％～90％，时间为10～50min；超声结束后加入0.06％(W/V)1800U/g的胃蛋白酶(pH＝2)，4℃酶提48h，于4℃下8000rpm离心45min，上清液即为脉冲超声辅助酶提胶原蛋白的粗提液；

(3)金枪鱼皮胶原蛋白制备：将步骤(2)制得的粗提液加NaCl至0.9M盐析过夜，6000rpm离心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，8000rpm离心45min，所得上清液加NaCl至2.4M盐析过夜，6000rpm离心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，透析3天，真空冷冻干燥获得金枪鱼皮胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声功率为：100、200、300、400W。

3.根据权利要求1所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声占空比为：10％(1s/9s)、30％(3s/7s)、50％(5s/5s)、70％(7s/3s)、90％(9s/1s)。

4.根据权利要求1所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声时间为：10、20、30、40、50min。

5.根据权利要求2所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声功率为：100W。

6.根据权利要求3所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声占空比为：70％(7s/3s)。

7.根据权利要求4所述的金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，

其特征在于其中步骤(2)中所述的超声时间为：40min。