[发明专利]抑制产肠毒素大肠杆菌K88菌毛的fae,faeG基因表达的中药药物组合物及应用

说明书

本发明公开了一种抑制产肠毒素大肠杆菌K88菌毛的fae,faeG基因表达的中药药物组合物及应用，它包括黄柏提取物和石榴皮提取物。本发明利用天然植物提取物抑制产肠毒素大肠杆菌菌毛的fae,faeG基因表达，降低ETEC在仔猪肠道上皮细胞的定植和繁殖，而不影响有益微生物在肠道的定植，增加了肠道有益菌的丰度，在降低仔猪发生腹泻风险的同时，保障了肠道菌群的多样性；同时黄柏和石榴皮中的抗氧化物质，保护仔猪断奶应激导致的肠道氧化损伤；与抗生素相比，中药药物组合物不易产生耐药性，且能克服抗生素在杀灭有害菌的同时，也降低了有益菌的丰度的副作用，更有利于生猪健康养殖，可以在临床上作为一种饲料添加剂长期使用。

技术领域

本发明涉及药物组合物，具体涉及一种抑制产肠毒素大肠杆菌K88菌毛的fae,faeG基因表达的中药药物组合物及应用。

背景技术

产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)属于肠杆菌科，埃希菌属，大肠埃希菌种，是致病性大肠杆菌中最常见的一类。ETEC是造成仔猪腹泻的主要致病菌，其致病性决定于在小肠上皮细胞上的定植能力和产生肠毒素的能力。肠毒素是导致腹泻的直接原因，只有大肠杆菌黏附在小肠上皮细胞上，才能避免被肠道蠕动和肠液冲刷所清除，进而在宿主体内定居和繁殖分泌肠毒素。ETEC作用的基础是能够黏附于肠道上皮细胞上，这一功能由细菌表面的菌毛所介导，菌毛黏附素与上皮细胞上的受体结合，两种物质在构型上相互匹配，菌毛黏附素可以接近上皮细胞与受体以共价键结合在一起，引起上皮细胞的蛋白磷酸化，细胞间Ca⁺升高，随后定植在肠道内大量繁殖，在ETEC生长过程中释放大量的肠毒素引起细胞内水和电解质失衡，从而产生腹泻。菌毛是细菌识别肠上皮细胞受体的重要结构，不同ETEC的菌毛抗原类型不同，其中以K88最为普遍和最为重要。根据血清型不同，K88可分为K88ab、K88ac和K88ad，对于K88的3种血清型，流行病调查表明K88ac是引起仔猪腹泻的主要病原菌，有研究通过检测腹泻仔猪体内44株阳性大肠杆菌发现，96％大肠杆菌有K88ac菌毛基因，仅有4％的大肠杆菌含有K88ab菌毛基因。K88菌毛的化学本质为蛋白质，为直径约2.1nm的丝状、柔毛样结构，K88菌毛蛋白的相对分子量在23.5-26.0之间。菌毛基因表达受温度、pH值和培养基组成的影响调控，37℃时表达良好，18℃～25℃时只产生少量菌毛，18℃以下时不产生菌毛。

编码K88菌毛的基因由faeA至faeJ这10个基因所构成，所编码的蛋白对应为FaeA至FaeJ，见图1。K88菌毛由几百个蛋白亚基构成，其中FaeG是主要结构蛋白，由faeG基因编码，分子量为27.5kDa，FaeG蛋白不仅含有大量的K88菌毛抗原决定簇，而且含有与K88受体结合的位点，除了FaeG亚基蛋白外，一些小分子蛋白如FaeC、FaeF、FaeH也是菌毛的组成部分。FaeC蛋白分子量为16.9kDa，位于菌毛顶端与启动菌毛的合成有关。FaeF(15.2kDa)和FaeH(25.5kDa)是影响菌毛合成的重要因素，参与菌毛的延伸过程，可以形成新生菌毛的支架，常分布于菌毛轴心两侧的菌毛体中，FaeD和FaeE是负责转运菌毛大小亚基蛋白穿过细胞周质和细胞膜的蛋白，K88菌毛中主要亚基和次要亚基在穿过大肠杆菌细胞质膜和外膜时至少需要FaeE和FaeD两种蛋白的协助。FaeE可以与菌毛蛋白FaeG、FaeH和FaeI在细胞周质形成异源蛋白复合物，防止提前聚合或被降解，传递菌毛亚基蛋白给外膜的FaeD转运蛋白，FaeD则转运菌毛亚基蛋白至胞外形成菌毛，同时将菌毛固定于细胞表面。FaeA是阻遏蛋白，FaeB是激活蛋白，两种蛋白主要起调控菌毛表达的作用，不参与K88菌毛的组成。