[发明专利]一种核桃多酚的制备工艺及其神经保护用途

说明书

本发明属于天然产物资源开发利用领域，提供了一种核桃多酚的提取方法及其神经保护用途。该提取方法是以抗氧化和神经保护作用为导向建立的，具体：将核桃仁用石油醚脱脂后，采用乙醇溶液室温下浸提得粗多酚，萃取其乙酸乙酯部位，采用NKA‑9树脂分离纯化，并进一步采用HP‑20分离纯化得到核桃多酚。本发明提供的提取方法得到的核桃多酚主要包含含有六羟基联苯酰(HHDP)基团的化合物，对于氧化应激和Aβ蛋白沉积的损伤具有很好的神经保护作用，可用于抗衰老和神经保护作用的药物或保健品的开发。

技术领域 本发明属于天然产物资源开发利用领域，涉及一种核桃多酚的提取方法及其神经保护用途。

背景技术 据统计，目前全球痴呆患者大约为3.65亿，每年新增0.77亿。在我国，早老性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)在65岁以上人群中的患病率约为3％～5％，且每年以8％的速率增长。AD已成为老年人致残致死最严重的疾病之一，AD的高发严重影响了老年人的生活质量，并且给家庭和社会带来巨大的心理和经济负担。因此研制安全有效的抗脑老化及AD的营养补充剂具有重要的现实意义。

大脑衰老及相关神经退行性疾病病理机制复杂，至今不明，其中氧化应激和β淀粉样蛋白(amyloid beta，Aβ)沉积是公认的脑衰老和AD发生发展的重要病因。因此，能够降低神经系统氧化应激损伤或Aβ损伤被认为是防治脑老化及相关神经退行性疾病的重要策略。

核桃自古以来就被认为是健脑益智的佳品，在美洲、欧洲被称为“益智果”，在我国有“长寿果”的美誉。现代医学与营养学研究证实，核桃具有益智(促进学习记忆)的功效，经常食用核桃可降低神经退行性疾病的患病风险，并可延缓衰老相关的认知功能障碍。大量研究表明核桃多酚是核桃益智及防治脑老化的重要功效组分，核桃多酚约占核桃总重的5％左右，种类多达120种，以鞣花酸，鞣酸单宁及黄酮类成分为主。然而目前的研究只限于对核桃多酚粗提物的功效研究，以活性为导向的制备工艺及其有效成分的分析研究未见报道，限制了核桃多酚相关药物和保健品等产品的开发。

发明内容

针对上述未解决问题，本发明的目的在于提供一种核桃多酚的提取方法及其神经保护用途，用于缓解衰老相关的氧化应激和Aβ沉积性神经损伤。该提取方法是以抗氧化和神经保护活性评价为导向建立的，并分析该提取方法得到的核桃多酚的组成，为核桃多酚相关功能产品的开发提供科学的实验数据，为阐明其神经保护作用的物质基础提供理论依据。

为实现上述目的，同时考虑核桃多酚的药品和食品相关用途，本发明提供了一种核桃多酚的提取方法，该提取方法包括以下步骤：步骤A将去壳的核桃仁粉碎，按料液比1∶3加入石油醚，在室温下持续搅拌浸提6h后，弃滤液，重复三次去除油脂；步骤B将脱脂后的核桃仁粕按料液比1∶5加入75％乙醇溶液，在室温(25℃)下持续搅拌浸提6h，抽滤取滤液，重复三次，将三次得到的提取液合并在45℃下旋蒸浓缩得到核桃粗多酚；步骤C将粗多酚和乙酸乙酯按1∶1混合萃取，第一次萃取12h，后两次萃4h，将三次萃取液合并在45℃下旋蒸得到乙酸乙酯部位浓缩液；步骤D采用极性树脂NKA-9对步骤C得到浓缩液进行进一步的纯化和分离。树脂预处理和装柱后用速率为1ml/min将浓度为3mg/ml的核桃多酚极性部位进行上样，用流速为0.5ml/min的50％乙醇进行洗脱，洗脱3次合并洗脱液；步骤E相同方法采用中等极性树脂HP-20对步骤D中得到乙醇洗脱物先进行75％乙醇洗脱，洗脱至少3次，然后采用100％乙醇洗脱3次，收集合并100％乙醇洗脱物于45℃下旋蒸浓缩干燥得核桃多酚。

本发明提供了一种核桃多酚的提取方法，该提取方法是以体外抗氧化活性包括DPPH、ABTS和FRAP试验和细胞水平神经保护活性包括抗H₂O₂和Aβ诱导的的类神经细胞人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤为导向的，可以获得具有更高活性的核桃多酚。