[发明专利]半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用

权利要求书

1.一种半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274在半滑舌鳎性别鉴定中的应用，所述的性别标签piR-mmu-72274来源于半滑舌鳎的精浆外泌体piRNA，序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT。

2.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274在半滑舌鳎性别鉴定中的应用，其特征在于所述精浆外泌体piRNA的筛选方法，具体步骤如下：

1）精浆外泌体分离鉴定后，对精浆外泌体smallRNA进行测序分析，Small RNA 种类繁多，将 clean reads 依次和 Rfam 数据库、cDNA 序列、物种重复序列库、piRBase 数据库进行比对，以对测序结果中的smallRNA 进行分类注释；将注释后的序列和 piRBase 数据库比对，进行已知 piRNA 的统计；使用未注释上的序列进行新的 piRNA 预测，piRNA差异表达分析，差异表达piRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析，最后与雄鱼、伪雄鱼样品进行相关性匹配，筛选出一种或者多种对雄鱼和伪雄鱼两种样品具有指示作用的piRNA作为候选的生物标记物；

2）提取随机两组验证样本：经外周血染色体鉴定后的雄鱼及伪雄鱼精浆来源外泌体总RNA，利用MicroRNA定量分析试剂盒定量检测候选piRNA的差异表达情况，筛选出最具标签指示作用的piRNA作为最终的标签piRNA；根据统计学分析原理，P值小于0.05为显著差异；筛选到在雄鱼与伪雄鱼中差异表达的piRNA生物标记物piR-mmu-72274，序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT。

3.一种半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括性别标签piR-mmu-72274定量检测引物，引物序列为F:GCATTGGTGGTTCAGTGGT ，R:TCGTATCCAGTGCAGGGTC，PCR逆转录引物序列piR-mmu-72274- RT ：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAAGGCGAGA，以及其它逆转录试剂和qPCR荧光定量试剂，内参piR为U6。