[发明专利]猫瘟热治疗性抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种猫瘟热治疗性抗体，以FPV灭活苗和FPV亚单位疫苗为免疫原，通过免疫马匹制得。据此建立了相应制备方法，该法创造性的以两种不同类型FPV免疫原按一定程序接种健康马匹，以FPV灭活苗为基础免疫原，以FPV亚单位疫苗为加强免疫原，产生高效价抗体后收集高免血，经IgG提纯、切除Fc’片段后制备获得高活性免疫球蛋白F(ab’)2。应用该法可大量制备马源抗FPV高免血清，提取和纯化高效价F(ab’)2抗体。试验表明，本发明制备猫瘟热治疗性抗体不仅具有较高的效价，同时具有确切的猫瘟热预防和治疗效果，可用于紧急预防和治疗猫瘟热，具有重要的现实意义和广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于猫瘟热治疗技术领域，尤其涉及一种猫瘟热治疗性抗体的制备方法。

背景技术

猫瘟热又名猫泛白细胞减少症、猫传染性肠炎等，是由猫细小病毒(FPV)引起的以猫科动物发生高热、呕吐、白细胞急剧减少和肠炎为主要特征的致死性传染性传染病。FPV在自然条件下可直接或间接感染猫科、浣熊科和鼬科等多种动物，是目前肉食兽细小病毒中感染范围最广、致病性最强的一种病毒，其中以小体型猫科动物和水貂最易感，FPV常呈地方性流行，感染FPV猫的病死率一般为60％～70％，最高可达90％以上，危害极为严重。

FPV是一种依赖宿主细胞进行复制的细小病毒，VP1和VP2为其结构蛋白，共同构成FPV病毒粒子的主要病毒衣壳蛋白。但在两种结构蛋白中，VP1只占10％，而VP2占到90％，因此VP2是形成FPV衣壳蛋白的主要成分。研究表明，VP2蛋白不仅具有血凝活性，同时也是FPV诱导机体产生中和抗体的主要保护性抗原，并且VP2蛋白能在哺乳动物细胞和杆状病毒表达系统中有效表达，自行组装形成病毒样粒子，而以FPV病毒样粒子制备FPV亚单位疫苗具有良好的免疫原性。

猫瘟热是猫科动物疾病预防的重点，目前，国内外均采用定期进行免疫注射的方法进行预防。然而，对于发病的动物，除注射单克隆抗体及高度免疫血清外，尚无有效可靠的药物治疗方法。虽然抗病毒高免血清是一种比较安全的免疫制剂，但因猫血液含量有限，猫源抗FPV高免血清制备成本高，且直接使用同源高免血清会因其纯度不高易造成动物产生不良反应，同时还可能会因血清中含有其它病原而导致某些传染病的扩散传播，因此，开发高纯度异源抗FPV抗体成了治疗猫瘟热的最佳选择。目前，国内对异源猫瘟热治疗抗体相关研究较少。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种猫瘟热治疗性抗体的制备方法，以缓解猫瘟热治疗抗体缺乏且防治效果不佳的现状。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

猫瘟热治疗性抗体，以FPV灭活苗和FPV亚单位疫苗为免疫原，通过免疫马匹制得。

上述猫瘟热治疗性抗体，以FPV灭活苗为基础免疫原，以FPV亚单位疫苗为加强免疫原，通过先后免疫马匹制得。

FPV灭活苗以FPV-GX01毒株(FPV临床分离株GX01)为基础制备；FPV亚单位疫苗以N-端连接信号肽HBM并经昆虫细胞密码子偏好优化的FPV-VP2基因在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中形成的FPV病毒样粒子为基础制备。

上述猫瘟热治疗性抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)分别利用FPV灭活苗和FPV亚单位疫苗对马匹进行免疫；

(2)当马匹血清中FPV血凝抑制效价≥1：32时，采集高免血；

(3)取高免血分离血清，用正辛酸-硫酸铵沉淀优化法提取IgG，制备获得免疫球蛋白F(ab’)2。

FPV灭活苗是利用FPV-GX01毒株与白油佐剂(按体积比1∶2(V/V)充分乳化制得。