[发明专利]抗波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体及其用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交瘤细胞株UMAB159(保藏编号为CGMCC No.15596)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。本发明还涉及UMAB159分泌产生的单克隆抗体在制备用于检测波形蛋白(Vimentin，VIM)的免疫检测工具中的应用，含该单克隆抗体的免疫组织化学检测试剂盒，以及该单克隆抗体在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与VIM蛋白特异性结合，显著提高了VIM蛋白免疫检测的特异性和可靠性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株UMAB159的开发、其分泌产生与波形蛋白(Vimentin，VIM)特异性结合的单克隆抗体的制备以及这种单克隆抗体应用于诊断的方法和用途。

背景技术

波形蛋白(Vimentin，VIM)是由466个氨基酸组成的，分子量大小约为57kDa的一种中间丝蛋白，在非螺旋状的N起始端和C末端分别有一高保守的螺旋形态的杆状结构域，被称作77-残基头端和61-残基尾端。VIM蛋白主要表达于间充质细胞及中胚层衍生来的细胞：1.间充质细胞包括纤维细胞、内皮细胞、中性粒细胞和巨噬细胞等；2.中胚层衍生来的细胞包括间皮细胞、表面上皮细胞及颗粒细胞、肌上皮细胞等。VIM蛋白主要功能在于维持细胞形态、稳定细胞骨架、参与有丝分裂和细胞分解、推进细胞粘连及移行等。大量文献报道在多种不同的肿瘤中，VIM蛋白表达量增加。例如，在前列腺癌，乳腺癌，子宫内膜癌，肝癌，恶性黑色素瘤，中枢神经系统肿瘤和胃肠道肿瘤包括胰腺，结直肠癌中，VIM蛋白呈现阳性表达。一个流行的理论(Robert Weinberg)认为癌细胞在转移前要经过一个从表皮细胞到间充质细胞的转化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)的过程，并且VIM蛋白的表达水平被认为在EMT过程中的一个重要的间充质细胞标记物，因此，在癌细胞中的VIM蛋白的过量表达导致了癌细胞转移及侵袭。总而言之，VIM蛋白不仅为肿瘤检测提供一个指标，对肿瘤的发生和进展都起着重要作用。

目前临床上主要通过免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC)病理实验检测肿瘤组织中VIM蛋白的表达状况，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对VIM蛋白的单克隆抗体具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能分泌产生抗VIM蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其生产的抗VIM蛋白的单克隆抗体和应用，提高所述单克隆抗体与VIM蛋白的结合特异性并应用到相关产品的制备中。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种能分泌产生抗VIM蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株UMAB159，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2018年4月26日，保藏编号为CGMCC No.15596。

本发明还提供了一种特异性结合VIM蛋白的单克隆抗体，有上述杂交瘤细胞株UMAB159分泌产生。

本发明所述能分泌产生抗VIM蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其生产的单克隆抗体UMAB159的制备方法如下：

(1)重组表达载体的构建：根据Vimentin ORF核苷酸序列(Vimentin ORF核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，1398bp；Vimentin氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，466aa)；

设计引物PCR扩增Vimentin ORF第628bp位到第1398bp位序列，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pET23a-N-His(购于Origene公司)，构建Vimentin的重组表达质粒pET23a-His-rVimentin；