[发明专利]一种准确度高的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂

说明书

本发明涉及临床体外检测技术领域，特别涉及一种准确度高的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂，包括试剂R1和R2。试剂R1中主要的组成成分有缓冲液、抗坏血酸氧化酶、肝素、无水、氯化钙、磷钨酸、吐温‑20、表面活性剂、色原、防腐剂；试剂R2中主要组成成分有缓冲液、保护剂、胆固醇酯酶（CHER）、胆固醇氧化酶(CHOR)、过氧化物酶、表面活性剂、4‑AA、防腐剂等主要成分，本发明针对于不同的干扰物质，特异性的选择对应的去干扰成分，从而保证产品的准确性和特异性，并且所选择的物质多为常见的化学物质，具有稳定、成本低的优点。

技术领域

本发明涉及临床体外检测技术领域，特别涉及一种准确度高的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂。

背景技术

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)可通俗地理解为好胆固醇，抗动脉粥样硬化,可减少患冠状动脉心脏病的危险。高密度脂蛋白胆固醇主要是由肝脏合成,与乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)相比，高密度脂蛋白(HDL)是密度最大的脂蛋白(d=1.063～1.210 kg/L)。其组分中蛋白质(Pro)、磷脂(PL)、胆固醇(chol)和甘油三酯(TG)各约占50%、25%、20%和5%。HDL中Pro主要是载脂蛋白(apo)AI和AII；chol占总胆固醇(TC)的25%～35%，酯化胆固醇(CE)和游离胆固醇(FC)之比约为3∶1。HDL可通过酶和受体的作用，将周围组织的chol移至肝脏降解处理，同时抑制细胞结合和摄取LDL-C，阻止chol在动脉壁的沉积，故HDL被认为是AS的预防因子。

血液中各种脂蛋白种类很多，包括乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)等各种物质，在测定血清 HDL-C时需要需根据各种脂蛋白的密度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将HDL与其他脂蛋白分离开,再测定 HDL组分中胆固醇含量。美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法( RM 法)为超速离心法,也为NCEP所推荐。国外把临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法分为3代。第1代为化学沉淀法,常用的沉淀剂为多聚阴离子,如磷钨酸(PTA)、DS、肝素或非离子多聚体如聚乙二醇与某些两价阳离子(如Mg²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺)合用。最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法,后多采用DS50-Mg2+法,欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg²⁺法)和聚乙二醇沉淀法(PEG法)。但此类方法受高三酰甘油(TG)的影响。第2代采用简便的磁珠DS-Mg^{2 +}分离法,省去了离心步骤,但需特殊装置,试剂不适用于推广应用。第3代为匀相测定法, 标本用量少,不需沉淀处理,可用自动生化分析仪测定,在准确度和精密度方面都有较大的改进，目前使用较广泛。均相法检测血高密度脂蛋白胆固醇的方法中也包含众多的方法，其中包含选择性抑制法、PEG修饰酶法、清除法、免疫分离法等等众多方法，其中选择性抑制法出现的最早，但是本方法存在抑制剂效果差，特异性不强等问题；PEG修饰酶法准确性较高，但是本方法需要将参与反应中的酶提前使用PEG修饰，并且难度较大，所修饰酶的活性也不易控制，因此存在较大技术难度，而免疫分离法则操作较复杂，不利于全自动推广；清除法是目前均相法检测高密度脂蛋白胆固醇方法中使用最广泛的方法，其主要的原理为将HDL-C以外的脂类进行激活暴露，然后加入胆固醇氧化酶和胆固醇酯酶进行反应，生成的H₂O₂,被过氧化氢酶或者过氧化物酶进行清除，然后在R2中加入适当的HDL-C激活剂进行激活，单独检测HDL-C的含量，本方法需要选择应用特异性非常强的物质对HDL-C进行抑制和对其他脂类物质进行激活，这种方法实际操作过程中存在较大的偏差，其根本原因就在于第一步反应中容易对HDL-C进行消耗或者对其他的脂类物质清除不够。基于清除法这些缺陷，本发明研究出一种不使用酶反应，直接清除HDL-C以外的其他脂类物质，然后在第二步反应中检测HDL-C的含量，本方法准确度高，且省去第一步中酶的参与，降低产品成本。

发明内容

本发明涉及一种准确度高的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂。