[发明专利]抗S100P蛋白单克隆抗体及其用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCC No.15595)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体Umab24。本发明还涉及单克隆抗体Umab24在制备用于检测S100P蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体Umab24的免疫组化试剂盒，以及单克隆抗体Umab24在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与S100P蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了S100P蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及可特异结合S100P蛋白的单克隆抗体Umab24、产生所述单克隆抗体的细胞株及应用该抗体用于诊断的方法和用途。

背景技术

S100蛋白家族目前已发现约25个成员，属于EF-hand超家族分子，其蛋白结构简单，但参与调节许多细胞进程，如调节细胞生长和运动、细胞周期进程和分化。S100蛋白定位于多种细胞的细胞质和/或细胞核，主要介导各种组织类型的免疫应答，同时还与神经元发育有关。研究表明，S100蛋白异常表达与癌症进展显著相关。

S100P是含有2个EF-hand钙结合基序的S100家族成员，编码95个氨基酸。转录激活后，在肺癌、乳腺癌、卵巢癌及胰腺癌等多种肿瘤细胞中表达升高。S100P的异常高水平被认为会导致肿瘤的发生和转移。目前临床上常用免疫组织化学(IHC)病理实验检测肿瘤细胞中蛋白的表达状况，然而IHC实验的核心为特异性结合蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对S100P蛋白的单克隆抗体对IHC检测S100P表达水平具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种结合特异性较高的S100P蛋白的单克隆抗体，及其在制备用于检测S100P蛋白的免疫检测工具中的应用。

本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2018年4月26日，保藏编号为CGMCC No.15595。

本发明还提供了一种特异性结合S100P蛋白的单克隆抗体Umab24，由上述杂交瘤细胞株产生。

本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：

(1)重组表达载体的构建：根据S100P ORF核苷酸序列(S100P ORF核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，288bp；S100P氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示)

设计引物PCR扩增S100P ORF第1bp位到第288bp位序列，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pCMV6-Entry，构建S100P氨基酸序列第1位到第95位的重组表达质粒pCMV6-rS100P；上游扩增引物序列，SEQ ID NO.3:CACGCGATCGCATGACGGAACTAGAGACAGCC下游扩增引物序列SEQ ID NO.4:ACCGACGCGT TTTGAGTCCTGCCTTCTCAAAG

(2)S100P重组蛋白的表达与纯化：将S100P重组表达质粒转化HEK293T细胞，裂解离心获得上清，DDK亲和层析柱纯化，获得纯化的S100P重组蛋白；

(3)单克隆抗体的筛选与制备：采用上述纯化的S100P重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗S100P特异性抗体的杂交瘤细胞株，命名为Umab24，亚型鉴定为IgG1；通过收集腹水制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得S100P单克隆抗体Umab24。分别通过Western Blot、免疫荧光实验及免疫组化实验验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。