[发明专利]一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法

权利要求书

1.一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将海藻酸钾粉末配成质量浓度为3-4.8％的海藻酸钾水溶液，搅拌均匀；

(2)将海藻酸钾水溶液置于35-39℃水浴中，加入褐藻胶裂解酶，搅拌酶解；

(3)酶解后进行醇沉，得到小分子海藻酸钾。

2.根据权利要求1所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，所述步骤(1)中海藻酸钾的分子量为600-1000kDa，古罗糖醛酸含量为10％-30％。

3.根据权利要求1所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，所述步骤(2)中初始添加褐藻胶裂解酶的体积分数为0.1-0.25％；

酶解过程中每隔0.5-0.8h补充褐藻胶裂解酶，补充的褐藻胶裂解酶浓度逐渐降低；酶解时间为6-8h。

4.根据权利要求1所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，编码所述褐藻胶裂解酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1。

5.根据权利要求4所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，褐藻胶裂解酶的制备方法如下：

1)以SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3为引物，扩增褐藻胶裂解酶全基因序列；

2)EcoR I和Hind III酶切大肠杆菌表达载体pProEXHTa及扩增序列，T4连接酶连接，转入大肠杆菌BL21中；

3)选取大肠杆菌重组菌，接种到含氨苄青霉素的液体LB培养基中，37℃培养12-16h；以2％接种量接种于含氨苄青霉素的液体LB培养基中培养至OD₆₀₀为0.5-0.8时，加入乳糖转至28℃培养25-34h，离心得到上清液即褐藻胶裂解酶。

6.根据权利要求5所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，乳糖终浓度为0.4％。

7.根据权利要求1所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，小分子海藻酸钾的分子量为1-3kDa，古罗糖醛酸含量为50-80％。

8.根据权利要求7所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，小分子海藻酸钾的分子量为0.7-1.5kDa，古罗糖醛酸含量为55.87-73.61％。

9.根据权利要求1所述的一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其特征在于，所述步骤(3)中醇沉方法如下：

1)酶解液离心，取上清，加入1倍体积乙醇静置；

2)取上清，加入3倍体积乙醇静置；

3)3倍体积乙醇静置后取沉淀，溶于水，旋转蒸发，冷冻干燥，得到小分子海藻酸钾，即产物1；

4)3倍体积乙醇静置后取上清，加入5倍体积乙醇静置，取上清，冷冻干燥后得到小分子海藻酸钾，即产物2。