[发明专利]一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法

说明书

本发明提供一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法，其步骤包括：步骤1.溶胀树脂；步骤2.脱除芴甲氧羰基保护基，步骤3.氨基酸的偶联反应，步骤4：多肽切割；步骤5：分离纯化；步骤6:多肽的表征；步骤7:肽与DNA的相互作用；本发明解决了现阶段多肽固相合成的存在的弊端，提高了偶联效率与合成产率，合成产率达到60％以上；本方法合成的五条多肽P1、P2、P3、P4、P5；利用反相高效液相色谱法将合成的各种肽进行分离纯化，使用质谱对目标肽进行表征，结果表明所合成的产物均为相应的目标肽，纯度均在95％以上；此外，所合成的多肽具有不同的结构，其中P3的序列结构可为以特定DNA为靶点的多肽类药物的设计提供了基础信息与支持。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法。

背景技术

小分子肽合成是蛋白质和多肽化学中的一个很活跃的领域，基本合成方法可分为液相合成和固相合成两大类。固相法是Robert Bruce Merrifield在1963年提出的，现在称之为固相肽合成(SPPS)，是肽化学的一个重大突破。与传统的液相工艺相比，固相法具有很多优势，例如缩短了生产周期，且通常具有较高的得率和纯度。它在许多肽类药物研究的进程中起到重要作用。随着新缩合方法和新型树脂的出现，固相法的整体效率普遍地提高。

在固相合成中，具有优良性能的载体往往是成功的关键，带有各种连接功能基的低交联聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂化学性质稳定，溶胀率适度，热稳定性和机械性能较好,是目前国内外最广泛使用的固相载体，而这其中又以王树脂的使用较为广泛。

传统的树脂多以聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物(PS)为骨架，通过氯甲基化制得氯甲基化聚苯乙烯树脂(Merridield树脂，PS-CH₂-Cl)，再通过与对羟基苯甲醇的反应引入功能基团；但是目前这样的树脂有以下的缺点：合成原料氯甲基化的聚苯乙烯反应中要用到强致癌的氯甲醚为原料；氯甲基化反应中会伴随氯甲基的多取代和二次交联，会影响到树脂的性能；此外，此方法合成的目标肽产率与纯度都不高。

发明内容

本发明提供一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法，其解决了现阶段多肽固相合成的存在的弊端，提高了偶联效率与合成产率，合成产率达到60％以上；本方法合成的五条多肽P1、P2、P3、P4、P5；利用反相高效液相色谱法将合成的各种肽进行分离纯化，使用质谱对目标肽进行表征，结果表明所合成的产物均为相应的目标肽，纯度均在95％以上；此外，所合成的多肽具有不同的结构，其中P3的序列结构可为以特定DNA为靶点的多肽类药物的设计提供了基础信息与支持。

本发明解决其技术问题所采用的的技术方案为：一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法，包括如下步骤：

一种结合DNA的多肽结构域的固相合成方法，包括如下步骤：

步骤1：溶胀树脂：称取1.0～1.5g,担载量为0.38mmol/g的Fmoc-L-Gly-WangResin，置于洁净干燥的固相合成管中，加入15～30mL的DMF，通入氮气通搅拌30～40min后，减压抽滤除去DMF，再分别用15mL的DMF洗涤树脂三次，滤除溶剂即得到溶胀好的树脂；

步骤2：脱除芴甲氧羰基保护基：避光条件下在步骤1中得到的溶胀好的树脂中加入20mL的脱保护试剂，之后充氮气搅拌10min后减压抽滤，再加入20mL脱保护试剂，通氮气搅拌25min后减压抽滤掉保护试剂，然后检测树脂是否脱除芴甲氧羰基保护基；脱除Fmoc保护基成功后，用20mL的DMF和20mL的甲醇交替对树脂洗涤7次，每次洗涤时间不低于3min；