[发明专利]一种青稞阿魏酰酪胺酰基转移酶基因及其用途

说明书

本发明提供了一种阿魏酰酪胺酰基转移酶基因HVUL4H14252，本发明还提供了包含该基因的重组载体、重组菌、转基因植物的制备方法，本发明还提供了阿魏酰酪胺酰基转移酶及其制备方法。本发明阿魏酰酪胺酰基转移酶可以合成中药单体阿魏酰酪胺，应用前景优良。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种青稞阿魏酰酪胺酰基转移酶基因的应用。

背景技术

中药活性成分阿魏酰酪胺具有清除自由基、抗氧化作用，同时还具有抑菌、抑制黑色素合成、刺激胰岛素分泌等活性。目前阿魏酰酪胺主要由石柑子、地骨皮等中药中提取。由于中药自然资源有限，仅仅依赖直接提取不能满足人们长期的需求。

青稞，青稞英文名：hullessbarley是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，因其内外颖壳分离，籽粒裸露，故又称裸大麦、元麦、米大麦。主要产自中国西藏、青海、四川、云南等地，是藏族人民的主要粮食。青稞在青藏高原上种植有3500年的历史，从物质文化之中延伸到精神文化领域，在青藏高原上形成了内涵丰富、极富民族特色的青稞文化，有着广泛的药用以及营养价值，已推出了青稞挂面、青稞馒头、青稞营养粉等青稞产品。

未见青稞中含有阿魏酰酪胺的报道。

发明内容

本发明通过对青稞的研究，发现了一种新的青稞阿魏酰酪胺酰基转移酶基因，其可以有效将阿魏酰基辅酶A转化为阿魏酰酪胺。

本发明提供了一种基因(阿魏酰酪胺酰基转移酶基因HVUL4H14252)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供了一种重组载体，它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

前述的重组载体，所述重组载体是重组pGEX-6P-1(Novagen)。

前述的重组菌，它包含前述的重组载体。

前述的重组菌，所述重组菌为Transetta(DE3)。

本发明还提供了一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

前述蛋白的方法，它是采用前述重组菌发酵制备。

前述蛋白的方法，步骤如下：

(1)取前述重组菌，活化，得菌液；

(2)将菌液接种到LB培养基中培养，3～4h后，加入IPTG诱导剂诱导培养，收集菌体；

(3)破菌，离心，取上清，纯化，即可。

步骤(1)中，所述菌液的浓度为1×10⁶～10⁷cfu/ml；优选地，所述活化是采用含有Amp的LB培养基培养培养，培养时间是6-10小时，培养温度为37℃；

和/或，步骤(2)中，所述菌液的接种比例为1:50；所述培养的温度是37℃，转速为200rpm；所述IPTG的浓度为1mol/L，加入量为培养液的1/100000；诱导培养的温度是20℃，转速为160rpm；

和/或，步骤(3)中，所述分离纯化的方法为GST标签融合蛋白纯化方法；优选地，所述纯化方法为：取上清，上树脂柱，穿流2次；采用Lysis buffer冲洗树脂去除杂蛋白；用15mmol/L还原型谷胱甘肽溶液洗脱，得蛋白；进一步优选地，所述树脂是GlutathioneSepharoseTM 4B树脂；所述还原型谷胱甘肽溶液是还原型谷胱甘肽溶于Lysis buffer得到的溶液。

前述的基因片段、重组载体、重组菌、蛋白在制备阿魏酰酪胺方面的用途。

本发明还提供了一种制备阿魏酰酪胺的方法，它是采用前述的基因片段、重组载体、重组菌、蛋白，以阿魏酰基辅酶A作为酰基供体，酪胺作为供体，制备阿魏酰酪胺。