[发明专利]一种可以同时抑制乙肝病毒DNA和乙肝表面抗原的反义核苷酸

说明书

本发明提供一种可以同时抑制乙肝病毒DNA和乙肝表面抗原的反义核苷酸，所述的反义核苷酸碱基序列包含在如下碱基序列中：5’‑aagaagatgaggcatagcagcaggatg‑3’，其中a代表腺嘌呤，g代表鸟嘌呤，c代表胞嘧啶，t代表胸腺嘧啶。还提供了所述反义核苷酸的用途及含有该反义核苷酸的药物组合物。

技术领域

本发明属于反义核苷酸领域，具体涉及一种可以同时抑制乙肝病毒DNA和乙肝表面抗原的反义核苷酸。

背景技术

全球有约2.4亿人为乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染者，如不经有效治疗，其中至少有约1/4的人群将最终发展为肝炎，肝硬化甚至肝细胞癌。每年全球有约65万人死于因HBV感染所致的肝衰竭，肝硬化和肝细胞癌。中国大陆有9300万慢性HBV感染者。根据中国疾病控制中心2016年的统计，当年仅新增乙肝病例数就有约107万人。

目前乙肝的治疗药物只有两类：干扰素类和HBV复制酶抑制剂-核苷(酸)类似物药物，包括：拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替比夫定、拉米夫定、替诺福韦艾拉酚胺、贝西福韦。干扰素类药物是非特异性的治疗药物，对慢性乙肝治疗效果有限，且具有明显的临床副作用及使用的不便利性。核苷(酸)类似物可以有效抑制HBV DNA水平，但是不能彻底清除病毒，需要长期服药。一旦出现耐药，可能表现为对所有同类核苷(酸)类的耐药，无其它用药选择。因此，在现有治疗条件下，慢性感染可以通过长期服药控制，但是基本不可治愈。由于可能出现的耐药，慢性乙肝感染人群仍面临较高疾病进展风险。

尽管已有较为成熟的乙肝预防性疫苗。但是，由于疫苗普及率低，疫苗注射后失效，特殊条件感染等原因，全球范围内乙肝病毒的传播并未停止。已感染人群基数庞大，对新的治疗方法的临床需求强烈。

乙肝病毒HBV是一种嗜肝DNA病毒(Hepadnaviridae)，基因组为部分双链的DNA结构。借助细胞表面受体-钠离子牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)等感染进入肝细胞后，基因组转化为全双链的闭环双链 DNA结构(cccDNA)。以cccDNA为模板，病毒将转录出若干RNA模板，并由此翻译产生宿主基因组整合所需的各种功能性蛋白和结构性蛋白。同时，还有大量的乙肝表面抗原(HBsAg)被表达并释放到宿主循环系统中。被感染者血液中HBsAg的水平通常达到病毒颗粒水平的100倍以上。大量的HBsAg可以导致宿主具有抗病毒功能的CD8⁺T细胞耗竭。而且有研究报道证实HBsAg还可以通过调控树突细胞，单核细胞和NK细胞的功能，直接抑制宿主HBV特异性的免疫学反应。HBV由此逃脱了宿主免疫系统的清除效应。

未来慢性乙肝治疗的第一个目标是实现“功能性治愈”，即：清除HBV DNA的同时，也清除HBsAg，实现HBsAg的血清学转换。终极目标则是实现细胞内HBV病毒的完全清除。这也有赖于HBsAg被清除，宿主免疫系统对HBV正常免疫学反应的恢复。

现有的核苷(酸)类直接抗病毒药物只能抑制cccDNA复制产生基因组DNA，对HBsAg的产生没有直接抑制作用。开发具有HBsAg清除作用的药物对慢性乙肝的临床治疗具有十分积极的意义。

近几年，有研究者在HBV模型动物体内以RNA干扰(RNAi)的方法实现了对HBsAg的高效抑制。而理论上使用技术更为成熟的硫代寡聚反义核苷酸(ASOs)技术，可以实现与RNAi相同的抑制效果。 ASOs可以通过碱基互补配对方式，特异性的与目标RNA互补结合，诱导RNase H依赖的RNA降解过程。如果选择合适的结合序列，ASOs可能同时实现对HBV DNA和HBsAg的抑制作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是利用硫代反义寡聚核苷酸药物技术，设计并筛选出同时具有抑制HBV DNA和HBsAg作用的反义寡聚核苷酸(ASOs)。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：