[发明专利]一种猪冻精用预稀释液

说明书

本发明涉及一种猪冻精用预稀释液，属于猪精液的冷冻保存技术领域。本发明以水为溶剂，各溶质及其浓度分别为：Tris 230‑270mmol/L、柠檬酸或柠檬酸水合物70‑90mmol/L；葡萄糖或葡萄糖水合物55‑70mmol/L，半胱氨酸盐酸或半胱氨酸或N‑乙酰半胱氨酸1‑5mmol/L。在本发明中以半光氨酸盐酸为抗氧化剂，极大地增强了精子的抗氧化能力，进而增强精子的抗冻性，提高猪冷冻精液的活率、活力等技术指标，最终提高冻精制作的合格率，其中葡萄糖作为精子的主要能源物质，柠檬酸和Tris相互配合主要作为缓冲溶液使用，维持稳定的pH和渗透压，降低精子活动，从而延长精子寿命并保持受精能力。

技术领域

本发明涉及一种猪冻精用预稀释液，属于猪精液的冷冻保存技术领域。

背景技术

猪的人工授精(artificial insemination，AI)技术，即利用人工方法采集公猪的精液，对其进行品质检查，将活率合格的原精进行稀释、分装、17℃恒温保存等，再用输精管将精液输送到发情母猪生殖道内，使其受孕。人工授精可提高公猪的配种效率，与本交相比，人工授精时一头优秀种公猪每年配种的母猪可提高10～20倍。由于良种公猪利用率的提高，加速了品种改良；减少公猪的饲养量，节省了饲养管理费用；可克服自然交配的难点，如公、母猪体格相差太大和某些生殖道异常等困难；可扩大优秀公猪在时间和地域上的利用率，为优秀种猪精液的资源共享提供便利条件；此外，人工授精还可以有效防止公、母猪多种疫病接触传染的可能。正是由于人工授精在养猪生产中具有很多优越性，使得这一技术在许多养猪发达国家得到大力推广。然而，国内外在猪的人工授精中所用的精液多为常温(15～20℃)液态保存鲜精液，配种时的精子活力较高(0.6～0.8)、配种母猪的受胎率较高(75％～85％)，但其鲜精一是不能长期保存(保存期一般在3～5天)，二是不便于远距离运输，因此，无法充分发挥优秀种公猪尤其是顶级种公猪的种用价值。

近年来，人工授精技术在猪繁育上的应用，已经从采用常温精液输配技术，逐渐转移到冻精制作和冻精输配技术上。冻精制作是指利用干冰(-79℃)、液氮(-196℃)等作制冷源，将精液特殊处理后冷冻，保存在超低温(-79℃或-196℃)的状态下，达到长期保存的目的。目前，这项技术再牛、羊上早已广泛推广应用，但由于猪的精液自身抗氧化能力的不足，猪的精子耐冻性差，公猪精液冷冻制作后，经解冻并稀释处理，检测猪的精子活率严重下降，导致猪的精液冷冻技术在猪场生产实践中始终难以广泛推广应用。有研究人员认为，氧化损伤是导致这个现象产生的主要因素之一。氧化损伤主要是由精子活性氧(如过氧化氢，超氧化物阴离子，羟自由基)水平的升高引起，活性氧能够破坏精子的蛋白、DNA和质膜中脂质。公猪精液对活性氧敏感性的原因是因为膜脂质中不饱和脂肪酸的浓度相对较高，而精浆的天然抗氧化能力相对较低。特别是，在冷冻保存过程中产生的超氧自由基将导致精子膜的脂质过氧化，膜的完整性降低和精子凋亡的增加，从而影响精子活力。Li J也在文献《Seminal plasma antioxidants are directly involved in boar spermcryotolerance》指出精液的抗冻性与精液抗氧化能力有关，现阶段，在猪冷冻精液制作过程中的预稀释步骤多采用Mondena、BTS、Androhep plus等鲜精稀释液，或者基于这些鲜精稀释液的配方进行了微调，这些稀释液不仅成分复杂，而且不能有效增强精液的抗氧化性，制作冻精的合格率极低。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种猪冻精用预稀释液，可有效保护冻精制作过程中的精子抵抗氧化损伤，从而提高冻精制作的合格率，扩大优良种公猪的利用效率，减少公猪的饲养量，降低猪场生产成本，显著增加经济效益。

为达到上述目的，本发明的猪冻精用预稀释液以水为溶剂，溶质及其浓度为：Tris230-270mmol/L、柠檬酸70-90mmol/L、葡萄糖55-70mmol/L、半胱氨酸盐酸1-5mmol/L。