[发明专利]一种端基为谷氨酸的呈鲜多肽表面分子印迹聚合物硅胶微球的制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种端基为谷氨酸的呈鲜多肽的表面分子印迹聚合物硅胶微球的制备方法，包括步骤：采用稀盐酸浸泡法，对硅胶微球表面进行除杂处理，得到活化硅胶微球；对活化硅胶微球进行表面硅烷化改性，得到硅烷化硅胶微球；对硅烷化硅胶微球进行RAFT功能化处理，得到表面接枝双硫酯键的RAFT功能化硅胶微球；替代模板分子、金属离子和功能单体自组装后，加入交联剂、引发剂以及RAFT功能化硅胶微球，通过RAFT聚合反应，得到表面包覆有替代模板分子的分子印迹涂层微球；洗脱除去表面包覆的替代模板分子；其中，所述替代模板分子为L‑谷氨酸，所述金属离子为Cusupgt;2+/supgt;，所述功能单体为1‑(N，N‑双羧甲基)氨基‑3‑烯丙基甘油。

技术领域

本发明属于化学分析测试领域，尤其涉及一种端基为谷氨酸的呈鲜多肽表面分子印迹聚合物硅胶微球的制备方法和应用。

背景技术

酱油是我国传统的酿造制品，是老百姓日常生活中不可或缺的调味品。独特的色、香、味使其成为深受我国人民喜爱的传统调味品。而鲜味是酱油中最重要的评价指标。人们发现酿造酱油中存在一类分子量在500Da以下的小分子多肽，这些小分子多肽能够显著提高食品整体鲜味强度，是酿造酱油中的风味物质，人们称这些小分子多肽为呈鲜多肽。经研究发现，大多数的呈鲜多肽是端基氨基酸为谷氨酸或天冬氨酸的二肽和三肽。借此，人们可以通过检测和分析酿造酱油中的呈鲜多肽的种类和含量，进一步揭示和掌握酱油的呈鲜机理。

目前，对于呈鲜多肽的分析方法主要为液相色谱法和液相色谱/质谱法。此两种方法均需先对样品溶液，即酱油进行预处理。而针对氨基酸、小分子多肽和蛋白质的分离和检测的样品预处理技术中，表面印迹技术作为一种新型的样品预处理技术，受到愈来愈广泛地关注。表面印迹技术的作用原理类似于酶-底物的“钥匙-锁”相互作用原理，以硅胶等材料作为支撑固相，以目标分子作为模板分子，通过化学反应生成相应地化学键将模板分子结合在支撑固相上，然后通过洗脱等手段将模板分子脱去，从而在支撑固相表面留出一个空位用于结合目标分子。由于模板分子与目标分子相同，因此，支撑固相表面留出的结合空位，只能特异性吸附结合目标分子，从而大大地提高了对样品溶液中目标分子的选择性，降低了与样品溶液中其他分子结合的概率，从而大大提高了检测的准确率。在该项技术中，我们将已经洗脱掉模板分子，留有支撑固相和表面目标分子结合空位的结构称为表面分子印迹聚合物。可以看出，表面印迹技术只需将样品溶液与表面分子印迹聚合物接触，即可完成样品溶液中目标分子的结合分离，操作十分简便且耗时少。

但现有技术中，用于检测氨基酸和多肽的表面分子印迹聚合物存在包覆不均匀、厚度不均一、性能不稳定等缺点。并且，现有的表面分子印迹聚合物的制备方法中，主要通过分子间作用力将模板分子结合到支撑固相上，由于分子间作用力十分微弱，因此结合到支撑固相上的模板分子数量有限，相应地所形成的结合空位数量也有限，使得所制得表面分子印迹聚合物不能够尽量多的或者完全吸附结合样品溶液中的目标分子，从而影响了检测的准确性。另外，现有技术中尚未将表面印迹技术应用于呈鲜多肽的检测和分析。

发明内容

基于此，本发明提供一种端基为谷氨酸的呈鲜多肽表面分子印迹聚合物硅胶微球的制备方法，以制备得到包覆均匀、厚度均一、性能稳定、能够同时特异性吸附多种端基为L-谷氨酸的呈鲜多肽分子、以及硅胶微球与模板分子之间的化学键更加牢固的表面分子印迹聚合物。

本发明的端基为谷氨酸的呈鲜多肽的表面分子印迹聚合物硅胶微球的制备方法，包括以下步骤：

S1：采用稀盐酸浸泡法，对硅胶微球表面进行除杂处理，得到活化硅胶微球；

S2：采用硅烷化试剂对活化硅胶微球进行表面硅烷化改性，得到硅烷化硅胶微球；

S3：采用RAFT试剂对硅烷化硅胶微球进行RAFT功能化处理，得到表面接枝双硫酯键的RAFT功能化硅胶微球；