[发明专利]一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将包含紫草素的紫草护肤膏与有机溶剂混合，获得混合溶液；

(2)采用碱水溶液对混合溶液进行提取，静置，取下层碱水溶液层，获得碱水溶液层；所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；

(3)向碱水溶液层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂进行萃取，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。

2.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(1)中所述有机溶剂为石油醚、戊烷、正己烷、环己烷、异辛烷、乙酸乙酯中的一种以上；

步骤(3)中所述有机溶剂为四氯化碳、二氯甲烷、氯仿、甲苯中的一种以上。

3.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中所述酸为盐酸，盐酸的浓度为5wt～10wt％；步骤(2)中所述碱水溶液的浓度为1wt％～10wt％。

4.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中所述pH为5。

5.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(2)中所述提取的次数为3～5次，每次提取时，碱水溶液的加入量为混合溶液中有机溶剂体积的1～2倍，静置的时间为10～30min；提取完后，将碱水溶液层合并，获得碱水溶液层的提取液。

6.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中萃取的次数为3～5次，每次萃取时，有机溶剂的量为加入酸后溶液体积的0.3～2倍，静置的时间为10～30min；萃取完后，合并有机层，去除有机层的有机溶剂，获得紫草素。

7.一种测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：

(a)将m₀质量的包含紫草素的紫草护肤膏按照前处理方法进行处理，获得固体紫草素；采用甲醇将固体紫草素配成溶液，获得待测样品，待测样品的体积为V；所述前处理方法为权利要求1～6任一项所述的前处理方法；

(b)利用紫草素标准样品，配置一系列不同浓度的标准溶液，通过高效液相色谱法测定，建立标准曲线，并制作线性回归方程；

(c)采用高效液相色谱仪对待测样品中紫草素进行检测，获得色谱图；

(d)利用紫草素标准曲线及线性回归方程，采用外标法，根据待测样品紫草素峰面积计算待测样品中紫草素含量即紫草素在待测样品中的浓度C；

(e)根据紫草素在待测样品中的含量以及待测样品的体积，计算m₀质量的包含紫草素的紫草护肤膏中紫草素含量。

8.根据权利要求7所述测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，其特征在于：步骤(e)中包含紫草素的紫草护肤膏中紫草素含量的计算公式为

C：待测样品中紫草素的浓度，mg/mL；

V：待测样品的体积，mL；

m₀：包含紫草素的紫草护肤膏的取样量，mg。

9.根据权利要求7所述测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，其特征在于：

步骤(a)中待测样品具体是指：采用甲醇溶解固体紫草素并定容，滤膜过滤，获得前处理液；再利用甲醇进行稀释，稀释至前处理液1～100倍，获得待测样品；

步骤(b)中所述标准曲线建立：

(b1)称取紫草素标准品，甲醇溶解并定容，获得1mg/mL的紫草素标准溶液；

(b2)采用系列稀释法，将1mg/mL的紫草素标准溶液稀释成0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL的紫草素标准溶液，利用高效液相色谱进样检测，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，制作峰面积和紫草素浓度的线性回归方程。

10.根据权利要求7所述测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，其特征在于：

步骤(c)中所述检测的条件为：

色谱柱：SHIMADZU InertSustain C18柱，5μm，250×4.6mm；

流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液，甲醇与磷酸水溶液的体积比为75:25；

流速：0.6～1.0mL/min；

柱温：25～35℃；

检测波长：515nm；

进样量：1～10μL。