[发明专利]一种测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法及高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的高效液相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：

(a)将m₀质量的W/O型紫草护肤乳按照前处理方法进行处理，获得固体紫草素；采用甲醇将固体紫草素配成溶液，获得待测样品，待测样品的体积为V；

(b)利用紫草素标准样品，配置一系列不同浓度的标准溶液，通过高效液相色谱法测定，建立标准曲线，并制作线性回归方程；

(c)采用高效液相色谱仪对待测样品中紫草素进行检测，获得色谱图；

(d)利用紫草素标准曲线及线性回归方程，采用外标法，根据待测样品紫草素峰面积计算待测样品中紫草素含量即紫草素在待测样品中的浓度C；

(e)根据紫草素在待测样品中的含量以及待测样品的体积，计算m₀质量的W/O型紫草护肤乳中紫草素含量；

所述前处理方法，包括以下步骤：

(1)将W/O型紫草护肤乳与碱水溶液混合，破乳萃取，取碱水层；

(2)向碱水层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂，静置萃取，取下层有机层，去除有机层中的有机溶剂，获得固体紫草素；

步骤(1)中所述破乳萃取在高速均质或超声的条件下进行；所述高速均质的转速为5000～15000rpm，高速均质的时间为5～15min；

所述超声的条件为：超声功率为450～1500W，超声频率为15～35KHz，超声时间120～300s；

步骤(1)中所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；

步骤(1)中所述碱水溶液的浓度为1wt％～10wt％；

步骤(2)中所述有机溶剂为四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲苯中一种以上；

步骤(2)中所述酸为盐酸，酸的浓度为5wt％～10wt％；

步骤(1)中破乳萃取的次数为3～5次，每次萃取时碱水溶液的用量为W/O型紫草护肤乳质量的5～20倍；

步骤(a)中待测样品具体是指：采用甲醇溶解固体紫草素并定容，滤膜过滤，获得前处理液；再利用甲醇进行稀释，稀释至前处理液1～100倍，获得待测样品；

步骤(b)中所述标准曲线建立：(b1)称取紫草素标准品，甲醇溶解并定容，获得1mg/mL的紫草素标准溶液；(b2)采用系列稀释法，将1mg/mL的紫草素标准溶液稀释成0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL的紫草素标准溶液，利用高效液相色谱进样检测，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，制作峰面积和紫草素浓度的线性回归方程；

步骤(c)中所述检测的条件为：

色谱柱：SHIMADZU InertSustain C18柱，5μm，250×4.6mm；

流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液，甲醇与磷酸水溶液的体积比为75:25；

流速：0.6～1.0mL/min；

柱温：25～35℃；

检测波长：515nm；

进样量：1～10μL。

2.根据权利要求1所述测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的高效液相色谱方法，其特征在于：

步骤(1)中，破乳萃取后，将产物进行离心，分离出碱水层；

步骤(2)中所述pH为5.0。

3.根据权利要求2所述测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的高效液相色谱方法，其特征在于：离心的转速为1000～6000r/min，离心时间为10～30min。

4.根据权利要求1所述测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的高效液相色谱方法，其特征在于：步骤(2)中所述萃取的次数为3～5次，每次萃取时有机溶剂的用量为加入酸后溶液质量的0.1～3倍，静置的时间为10～30min。

5.根据权利要求1所述测定W/O型紫草护肤乳中紫草素的高效液相色谱方法，其特征在于：步骤(e)中W/O型紫草护肤乳中紫草素含量的计算公式：

C：待测样品中紫草素的浓度，mg/mL；

V：待测样品的体积，mL；

m₀：包含紫草素的紫草护肤膏的取样量，mg。