[发明专利]基于CII的环状多肽及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，公开一种基于CII的环状多肽，所述环状多肽的氨基酸序列通式为：Acp1‑Cys2‑Xaa3‑Xaa4‑Xaa5‑Xaa6‑Xaa7‑Xaa8‑Xaa9‑Xaa10‑Xaa11‑Xaa12‑Xaa13‑Xaa14‑Xaa15‑Xaa16‑Xaa17‑Cys18‑Ala19；其中，第10位的氨基酸为瓜氨酸；第2位的半胱氨酸(Cys)和第18位的半胱氨酸(Cys)形成分子内二硫键；丙氨酸(Ala)连接在半胱氨酸(Cys)的碳端，6‑氨基己酸(Acp)连接在半胱氨酸(Cys)的氮端；所述CII具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，其上含有54个精氨酸(Arg)；环状多肽中第3位至第9位的氨基酸、第11位至第17位的氨基酸为环状多肽中的瓜氨酸与CII氨基酸序列中的第N个精氨酸(Arg)位置重合时，分别按照CII氨基酸序列向两边扩展的7个氨基酸；所述N为4,5,6,19,22,28,34,38,46或49。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说是一种基于CII的环状多肽及其应用。

背景技术

抗瓜氨酸化蛋白抗体(Anti-Citrullinated Protein Antiboides,ACPAs)是类风湿关节炎患者(RA)的一个重要生物标记物，具有较高的敏感性和特异性，而且可在疾病发病的几年前被检测到。ACPAs的评估通常通过检测血清对第二代环瓜氨酸肽(Cycliccitrullinated peptide-2,CCP-2)的反应来确定。该方式可以预测RA的发展和相关的关节破坏程度。有研究表面，RA患者血清中存在多种抗瓜氨酸化蛋白的抗体，例如波形蛋白，烯醇酶，纤维原蛋白等。

二型胶原蛋白(Collagen type II,CII)是RA主要的自身抗原，它属于胶原蛋家族的一员，其他还包括I型、V型，IX型和XI型胶原蛋白。CII由三条相同的α链组成，并形成三螺旋结构，多个CII聚集在一起组成原纤维。同时，IX和XI型胶原蛋白修饰纤维表面，与CII相互结合共同组成纤维束。CII是关节软骨(Articular Cartilage,AC)细胞外基质(ExtraCellular Matrix,ECM)的主要组成部分，也是RA炎症反应的主要攻击目标。CII上存在不同的免疫显性抗原表位，可以被B细胞识别，某些表位的抗体可在非B细胞或T细胞依赖性动物模型中诱导RA的发生。在RA患者血清中，可以检测到抗瓜氨酸化CII的抗体。

虽然CCP-2试剂盒可以检测血清中CCP-2抗体滴度，从而判断是否患有类风湿关节炎。但目前CCP-2的检测在RA患者中的特异性大约在75％左右，并且该试剂盒中的多肽序列和来源均未知。CCP-2试剂盒并不能检测对CII表位特异性的抗体。因此，为了开发一种可以检测CII特异性抗体的多肽，提高RA检测的特异性和灵敏度，有效地指导患者的治疗以及愈后的评估，有必要对现有技术进行改进。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于CII的环状多肽及其应用。

本发明为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：

一种基于CII的环状多肽，所述环状多肽的氨基酸序列通式为：

Acp1-Cys2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Cys18-Ala19；

其中，第10位的氨基酸为瓜氨酸；第2位的半胱氨酸(Cys)和第18位的半胱氨酸(Cys)形成分子内二硫键；丙氨酸(Ala)连接在半胱氨酸(Cys)的碳端，6-氨基己酸(Acp)连接在半胱氨酸(Cys)的氮端；