[发明专利]经化学修饰的鸭血SOD制剂的制备方法

权利要求书

1.一种经化学修饰的鸭血SOD制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：

(S11)将鸭血SOD冻干粉用蒸馏水溶解，配置成活力为2000-5000U/ml的酶溶液；

(S12)将聚乙二醇4000、维生素E按质量比为4-5:1混合，溶于硼酸钠缓冲溶液中，配置成总浓度为3-8mol/L的修饰剂溶液；

(S13)将修饰剂溶液与酶溶液按质量比为1:1混合，室温搅拌2-5h，用Tris-HCl缓冲溶液透析、浓缩，过预先平衡好的Sephadex G-25色谱柱，收集洗脱液，加入0.05-0.5mol/L的稳定剂溶液，所述稳定剂包括L-组氨酸、L-精氨酸、L-甲硫氨酸和β-环糊精中的至少一种；

(S14)进行真空冷冻干燥，得到修饰后的SOD制剂；

所述稳定剂为L-组氨酸、L-精氨酸和β-环糊精按重量比为1.5:1:2.5复配得到。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硼酸钠缓冲溶液浓度为10-20mmol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲溶液浓度为20-30mmol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，平衡液为2.5mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，洗脱液为10mmol/L的Tris-HCl-NaCl缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述鸭血SOD冻干粉采用以下工艺制备得到：

(S21)采集新鲜鸭血，加入5-8％的柠檬酸钠抗凝液，抗凝液与鸭血的体积比为1:5-8，离心收集红细胞；

(S22)用生理盐水洗涤3次以上，每次洗涤后进行离心，然后加入红细胞体积2-3倍的去离子水，搅拌1-2h，使红细胞破碎，充分溶血；

(S23)加入重量比分别为4-5％、0.2-1％的氯化钠和硫酸铜，加压过滤，再将滤液用截留分子量为3000-6000D的中空纤维膜超滤浓缩，得到SOD浓缩液；

(S24)调节PH为5.5-6.5，于55-60℃水浴中加热30-50min，冷却，离心，然后取上清液，过预先用2-3mmol/L的磷酸缓冲液平衡的阴离子交换层析柱，用5-10mmol/L的磷酸缓冲液洗脱，收集SOD洗脱液，经真空冷冻干燥，得到鸭血SOD冻干粉。