[发明专利]一种水生植物金银莲花的组培快繁方法和应用

权利要求书

1.一种金银莲花优质种苗的组培快繁方法，其特征在于由以下步骤组成：

(1)脱毒母本的获得

从野外自然湿地中采集金银莲花植株，剪取带有分蘖芽的茎段，于洗涤液中浸洗0.5～2h后，用自来水冲洗干净,在超净工作室中，用70％～75％乙醇浸泡10～60s后，再以0.1％HgCl₂或1:10稀释的商用漂白剂NaClO消毒液浸泡消毒2～30min，再用无菌水彻底漂洗干净,将材料进一步切割整理后接种于装有已灭菌培养液①的三角瓶中，并以透气封口膜封口，置于专用组培架上培养,维持平均光照强度1000～5000lx，每日光照8～12h，室内温度20～30℃,一个月后挑出有新芽冒出且无细菌生长的材料,即金银莲花脱毒母本,所述培养液①为：1/4～1倍的MS+10～20g/L的蔗糖+0.5～3.0mg/L的细胞分裂素KT或6-BA+0.1～1.5mg/L的生长素IAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；

(2)丛生芽的扩增

取上述步骤(1)所得金银莲花脱毒母本，于无菌操作台上转接入已灭菌的培养液②中，将三角瓶放回原组培架上培养30d，待瓶中金银莲花丛生芽足够多时取出，每3～5芽切割分瓶，并继续扩繁，直至总芽数达到所需数量，所述培养液②为：1/2～1倍的MS+15～40g/L的蔗糖+0.5～3.0mg/L的细胞分裂素KT或6-BA+0.1～1.5mg/L的生长素IAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；

(3)生根与完整植株的诱导

取上述步骤(2)所得金银莲花丛芽，于无菌操作台上以每1～2个芽切割分离，转接入已灭菌的培养液③中，将三角瓶放回原组培架上培养15～30d，等待瓶中金银莲花生根并形成完整幼苗，所述培养液③为：1/4～1倍的MS+7.5～30g/L的蔗糖+0.01～0.5mg/L的生长素NAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；

(4)壮苗与移栽

将上述步骤(3)所得金银莲花幼苗从三角瓶中取出，若准备应用于室内水族缸中，则根据水族缸栽培的无菌要求，先以无菌水、去离子水或自来水冲洗以去除材料表面残余培养液，然后在无菌或有菌条件下将组培苗投入水族缸中，若准备应用于湿地公园建设或湿地生态恢复室外大型工程，则将组培苗先过自来水冲洗，清除MS和激素残余，后转入含稀释Hoagland营养液的开放水培箱中，并置于温室或室外壮苗2～4周，初期若遇室外光照过强，用遮阳网挡去1/2太阳光，3～7d后组培苗能完全适应自然光，金银莲花组培苗的大规模移栽采用两种方式，其一为直接抛撒入自然水体使其漂浮生长，初期以围栏圈围防止其漂走，其二为先栽入以塘泥、泥炭土为主要成分的基质中，然后再移入浅水水体，这样定植更快，但初栽时水位深度不超过1m。

2.权利要求1所述一种金银莲花优质种苗的组培快繁方法在室内水族观赏布景或室外湿地公园建设或大型湿地生态修复工程中的应用。