[发明专利]一种动脉壁成分的染色和鉴定方法

说明书

一种动脉壁成分的染色和鉴定方法，其特征在于：对石蜡动脉切片依次经加温、脱蜡、水化、铁化苏木精染色、酸性苯胺蓝染色、酸性红染色，再经脱水、透明、封片，使动脉壁中不同成分呈现不同颜色。本发明细胞核被染成深蓝或者黑色为小圆点或小长条；弹力纤维被染成黑色呈绳梭状；胶原纤维被染成蓝色为绳梭状；内皮细胞胞质被染成玫瑰红色为长条形；平滑肌细胞胞质被染成玫瑰红色为长梭形。依据这些染成的颜色和形态学特点，从而识别动脉壁成分。通过染色使动脉壁不同成分呈现不同颜色，通过区别颜色、结合形态学改变，识别动脉壁成分，协助动脉的诊断及治疗。

技术领域

本发明涉及一种方法，特别是一种动脉壁成分的染色和鉴定方法。

背景技术

在临床医学和动物科研过程中，经常需要对动脉进行检测。这其中涉及动脉的病理检测、需要对动脉壁的每种成分进行观察和鉴定。

正常动脉壁包括三层：(1)内层：靠近血流、又叫内膜，是动脉壁最薄的一层，由动脉内皮细胞构成，起到屏障和保护动脉的作用；(2)中层：位于内层和外层之间，又叫中膜，是动脉壁最厚的一层，由排列整齐的多层平滑肌细胞、弹力纤维和排列不规则的胶原纤维构成，具有收缩和舒张功能；(3)外层：为接触到血管周围组织的部分，由疏松结蹄组织构成，以成纤维细胞为主、并含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和较多胶原纤维。

在动脉粥样硬化及高血压等病理情况下，动脉三层的结构、成分将发生改变，对它们的正确鉴别有利与分析该病人或动物的病理生理情况，从而正确指导诊断和治疗。

现有技术中涉及动脉壁的染色及识别技术主要有：(1)无染色：这种情况是动脉标本制成冰冻或石蜡切片后直接放在显微镜下观察，可以看到动脉的轮廓，推测动脉壁各种成分但无法细致区分。(2)苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)，简称HE染色：是现病理技术中最常用的染色方法，被广泛应用于临床病理及科研实验。HE染色中只有两种染料，其中苏木精为碱性染料，将细胞核内染色质的核糖体染成紫蓝色；而伊红是酸性染料，将细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。故HE染色的优点是简单，染料品种少、染色步骤少、染色过程快。缺点是，除细胞胞核被染成蓝色外，其它成分均被染成红色，无法确切区分动脉壁的其它成分。(3)动脉内皮细胞免疫组化染色：即血管性血友病因子(vWF)免疫组织化学染色。它可特异性的区别动脉内皮细胞，染色原理是动脉内皮细胞特异性的表达vWF,故采用可以识别vWF的抗vWF抗体进行免疫组化染色，通过抗原-抗体特异性结合及化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而定位定量定性的研究动脉内皮细胞。缺点是耗时长、无法确定动脉壁其它成分。(4)平滑肌免疫组化染色：即阿尔法-肌动蛋白(α-actin)平滑肌细胞免疫组织化学染色。它可特异性的区别动脉平滑肌细胞，染色原理与动脉内皮细胞类似。动脉平滑肌细胞特异性的表达具有收缩功能的微丝蛋白α-actin，因此，采用可识别α-actin的抗α-actin抗体、并结合化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定平滑肌细胞。除α-actin外，α-SMA也是阿尔法-肌动蛋白，同样用于平滑肌细胞的免疫组化检测。缺点是α-actin抗体和α-SMA抗体均无法识别动脉壁其它成分。

上述各种染色可以观察到动脉壁的轮廓，可以分别观察到细胞核、动脉内皮细胞或平滑肌细胞，缺点是不能同时区别动脉壁的所有成分。而同时正确鉴别动脉壁的各个成分具有一定必要性。因此，现有的动脉染色技术有待进一步提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过化学染色使动脉壁不同成分呈现不同颜色，通过区别颜色、结合形态学改变，从而识别动脉壁成分，协助动脉的诊断及治疗的动脉壁成分的染色和鉴定方法。

本发明的目的可以通过以下措施来达到：一种动脉壁成分的染色和鉴定方法，其特征在于：对石蜡动脉切片依次经加温、脱蜡、水化、铁化苏木精染色、酸性苯胺蓝染色、酸性红染色，再经脱水、透明、封片，使动脉壁中不同成分呈现不同颜色。

本发明的目的还可以通过以下措施来达到：