[发明专利]一种含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物与应用

权利要求书

1.一种含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于包含牡丹提取物和成纤维细胞培养上清液；

所述的牡丹提取物和成纤维细胞培养上清液的质量比为(0.5～1)：5。

2.根据权利要求1所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于：

所述的牡丹提取物的制备方法，包含如下步骤：

(1)盛开期牡丹花朵采摘后干燥，粉碎，过筛，得到牡丹花瓣粗粉；

(2)将步骤(1)制得的牡丹花瓣粗粉超微粉碎，然后过筛，得到牡丹花瓣超微粉；

(3)将步骤(2)制得的牡丹花瓣超微粉采用CO₂超临界流体萃取，其中，萃取温度35～45℃，萃取压力25～40Mpa，萃取时间为2～4h，CO₂流速为10～15L/h；得到牡丹提取物。

3.根据权利要求2所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于：

步骤(1)中所述的牡丹的品种为洛阳红。

4.根据权利要求2所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于：

步骤(3)中所述的CO₂超临界流体萃取的条件为萃取温度37～40℃，萃取压力30～35Mpa，萃取时间为2～4h，CO₂流速为12～13L/h。

5.根据权利要求1所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于：

所述的成纤维细胞培养上清液的制备方法，包含如下步骤：

(1)将羊耳组织剪成小块，然后加入胰蛋白酶溶液进行消化处理；消化后加入含FBS的DMEM培养液终止消化，然后充分吹打，使细胞脱落；过滤，离心，收集细胞；

(2)原代培养：将步骤(1)收集的细胞用含双抗和FBS的DMEM高糖培养液重悬，培养48～72h后换液，弃去未贴壁细胞；继续培养；

(3)传代培养：细胞生长至70％～80％汇合时，分离细胞和细胞培养液，细胞培养液离心，得到上清液1；分离得到的细胞洗涤后加入胰蛋白酶溶液消化至80％的细胞脱壁、变圆、分离成单个细胞时，加入含FBS的DMEM培养液终止消化，离心，收集细胞，加入含FBS的DMEM培养液重悬，进行传代培养；传代培养过程中，分别收集传代至1～6代的细胞培养液，细胞培养液离心，收集上清液，并合并上清液，得到上清液2；

(4)将步骤(3)制得的上清液1和上清液2混合，得到成纤维细胞培养上清液。

6.根据权利要求2所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物，其特征在于：

步骤(3)中收集传代至1～3代的细胞培养液。

7.权利要求1～6任一项所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

将牡丹提取物和成纤维细胞培养上清液混合均匀，得到含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物。

8.权利要求1～6任一项所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物在护肤品领域中的应用。

9.根据权利要求8所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物在护肤品领域中的应用，其特征在于：

所述的护肤品中含含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物的用量为0.05～10wt％。

10.根据权利要求9所述的含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物在护肤品领域中的应用，其特征在于：

所述的护肤品中含含细胞生长因子和牡丹提取物的护肤组合物的用量为1～5wt％。