[发明专利]一管式存储至少两种RCR试剂的方法

说明书

本发明公开了一种一管式存储至少两种RCR试剂的方法，是将不能同时存储在一起的多种制剂采用相变材料进行分割包埋，使其同时密封封存在同一反应管内，其中体积较大的试剂包埋在反应管上部，体积较小的试剂包埋在反应管下部。本发明的优点在于方法简单，将RCR反应的不同试剂通过相变材料进行分装和隔离在一个反应管内，试剂被相变材料密闭包埋其中，不容易挥发，有效保证了试剂的稳定性；试剂无需在‑18℃以下保存运输，实现了试剂的冷藏保存运输或15天内常温保存运输，大大降低了存储和运输的成本，便于床边检测技术的推广应用；使用时加热溶解相变材料，打开相变材料封隔层，上层试剂依靠重力沉降与下层试剂自动实现体系构建，非常便于实现POCT核酸检测。

技术领域

本发明涉及基因检测用试剂的存储，尤其是涉及一种一管式存储至少两种RCR试剂的方法 。

背景技术

RT-PCR（reverse transcript PCR，逆转录PCR，或称为反转录PCR），是聚合酶链式反应的一种应用的延伸。在RT-PCR过程中，一条RNA链被逆转录称为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avianmyeloblastosis virus,AMV ）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murineleukemia virus，MMLV）反转录酶。

RT-PCR通常有一步法RT-PCR和两步法RT-PCR两种方法。一步法RT-PCR操作简便，RT和PCR之间无需开管，能够减少污染的可能性，RT过程得到的cDNA产物全部用于PCR扩增，使得一步法的灵敏度更高。两步法RT-PCR，是RT和PCR分别在最优条件下进行反应使得两个反应充分发挥各自特点，但需要进行开盖操作，操作过程中容易被污染，导致出现假阳性现象。

目前，市场上基因检测主要在医院的临床分子诊断中心或者通过抽取血液样本并外送到第三方医学检验所进行检测，整个过程包括抽血、保存样本并寄送到专业的实验室、在实验室中进行细胞的裂解和核酸的提纯、进行PCR扩增、并使用专业的设备进行检测、出具报告。从取样到生成报告，一般为24～168小时，整个过程速度慢、耗时长；由于样本转移的步骤多，因此容易造成污染，且需要筹建专业的实验室和购买专业的设备，并配备专业的操作人员，这些因素都会增加整个医院的运行成本，对基因检测的广泛应用造成了极大的阻碍。

POCT（即时检验），指在病人旁边进行的临床检测，通常不一定是临床检验师来进行。由于是在采样现场即刻进行分析，省去了标本在实验室检验时的复杂处理程序，是可以快速得到检验结果的一类新方法。近年来，由于当今高新技术的发展和医学科学的进步，以及高效快节奏的工作方式，使得具有实验室仪器小型化、操作简单化、报告结果及时化的POCT方法越来越受到人们的青睐。

分子核酸检测操作步骤复杂，容易被交叉污染，若想实现POCT检测，需要求试剂检测过程中全封闭，一旦启动全自动检测程序，就无需人工干预。这就要求在一个封闭卡盒里完成核酸提取和PCR扩增检测的全部检测过程，单人份分装。

一步法RT-PCR使用的商品试剂盒一般包括2个试剂组分：酶和PCR反应液，因为两个试剂组分在一起不能长期保存，所以两组分是分装在不同的容器内的。酶组分含有不耐热的反转录酶，起反转录功能，试剂必须保存在-18℃以下冷冻保存运输，而POCT单人份卡盒若需要-18℃保存运输条件，由于成本较高，不便于实现床边检测技术的推广应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一管式存储至少两种RCR试剂的方法，采用该方法可实现反应试剂冷藏或常温条件下存储，大大降低了检测试剂盒的运输存储成本。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的一管式存储至少两种RCR试剂的方法，是将不能同时存储在一起的多种制剂采用相变材料进行分割包埋，使其同时密封封存在同一反应管内，其中体积较大的试剂包埋在反应管上部，体积较小的试剂包埋在反应管下部。