[发明专利]一种用于检测人类疱疹病毒4型的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测人类疱疹病毒4型的试剂盒，包括用于检测人类疱疹病毒4型的2条特异性引物和1条特异性探针，依据人基因组β珠蛋白特异性设计的2条引物和1条特异性探针，阴性质控品、阳性质控品和定量参考品A、B、C、D；其序列为SEQ ID No.1~6。本发明的优点在于检测方便快捷，能在较短的时间内定量检测人类疱疹病毒4型；灵敏度高，最低检出限为5 IU/ml，相当于100 Copies/mL；特异性好，本发明根据内重复序列BamHIW设计1对引物，与其他病原体无交叉干扰，具有较高的特异性；本发明溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL，定量结果具有可追溯性，对于人类疱疹病毒4型引物的相关疾病的临床诊断具有较高的参考价值，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，尤其是涉及一种用于检测人类疱疹病毒4型的试剂盒。

背景技术

人类疱疹病毒4型，简称EB病毒，主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。该病毒感染不仅和儿童的传染性单核细胞增多症、家族性遗传病X连锁淋巴细胞增生综合症、EBV病毒相关淋巴组织细胞增生性噬血综合症和慢性活动性EBV感染有密切关系，还与全球约1%的肿瘤（胃癌、鼻咽癌、Burkitt肿瘤、Hodgkin肿瘤）发病有关，被世界卫生组织归类为第一类致癌物。目前人类疱疹病毒4型的检测主要是传统的酶联免疫吸附法、胶体金法和化学发光法，存在窗口期长、操作繁琐、假阳性和假阴性问题。PCR技术由于其灵敏度高、特异性好和操作简便，已经越来越广泛地应用于病毒检测，目前已有少部分公司将PCR技术应用于人类疱疹病毒4型检测，但由于各厂家定量单位均未溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL，且灵敏度很低（400 Copies/mL），导致临床病患漏检现象很多，各厂家定量结果无可比性、无溯源性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL且操作简单，灵敏度高，特异性好的用于检测人类疱疹病毒4型的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于检测人类疱疹病毒4型的试剂盒，包括用于检测人类疱疹病毒4型的2条特异性引物和1条特异性探针，依据人基因组β珠蛋白特异性设计的2条引物和1条特异性探针，阴性质控品、阳性质控品和定量参考品A、B、C、D；其中

用于检测人类疱疹病毒4型的2条特异性引物为引物1和引物2，其序列为：

引物1：5’- CATGGGGCAATTGGGCATAC -3’（SEQ ID No.1），

引物2：5’- AAAGCCGTCGCATGTCTGAT -3’（SEQ ID No.2）；

依据人基因组β珠蛋白特异性设计的2条引物为引物3和引物4，其序列为：

引物3：5’- TGGAACATATTTGACGGCTTT -3’（SEQ ID No.3），

引物4：5’- GATCTTAGCTACTACTGCCAA -3’（SEQ ID No.4）；

用于检测人类疱疹病毒4型的特异性探针为探针1，其序列为：

探针1：FAM- CATGTTGTCACGTCACTCAGCTCC –BHQ1（SEQ ID No.5）；

依据人基因组β珠蛋白特异性设计的特异性探针为探针2，其序列号为：

探针2：ROX- AAACCCACTGCATCACTCT –BHQ2（SEQ ID No.6）。

所述阴性质控品为仅含人β珠蛋白基因的质粒。

所述阳性质控品为含人类疱疹病毒4型DNA片段的质粒和人β珠蛋白基因质粒。