[发明专利]一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法

说明书

本发明公开一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。该方法为：将第2‑10代小鼠胚胎成纤维细胞接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化，稀释，铺板。在37℃，5% CO₂的细胞培养箱中孵育24h后，向不同的孔中加入不同浓度的油酸进行诱导，在37℃，5% CO₂孵育24h后，诱导完成，进行油红O染色观察。本发明用不同浓度OA直接在体外诱导分化出脂肪细胞，成功率高，而且诱导周期短只需要24h，大大缩短了传统方法的诱导周期，而且该方法操作简单，诱导出的脂肪细胞形态均一，大小可控，为体外构建脂肪细胞模型提供了一个简单高效的方法。

技术领域

本发明涉及脂肪细胞诱导领域,尤其涉及一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。

背景技术

由于人们生活水平的提高，肥胖人群和肥胖病的发病率也越来越多。世界卫生组织将肥胖定义为一种危及人体健康的体内堆积脂肪过多或分布异常的疾病。肥胖是一种慢性的持续状态, 以身体脂肪过多为特点.它是慢性疾病发生的主要诱因，可以诱发与心血管疾病相关的多种代谢功能异常，会增加2 型糖尿病、冠心病、中风、等的发病率和死亡率。所以目前对于肥胖的研究和治疗，也是越来越迫切。

肥胖问题的根本原因就是体内脂质代谢异常，摄入的能量大于消耗的能量，导致脂质在体内过度积累。脂肪组织作为主要的储脂组织，已有大量的研究关注于脂肪组织的脂代谢对于全身代谢的影响，越来越多的学者认为脂肪组织在代谢中占据着中心的位置。而脂肪细胞的脂质代谢异常和功能紊乱就是肥胖的核心机制之一，所以构建脂肪细胞模型是研究肥胖问题的一个关键途径。

由于从脂肪组织中分离高纯度且处于同一时期的脂肪细胞难度较大，因此人们对于脂肪细胞增殖分化及调控方面的了解主要来源于体外细胞培养模型。前体脂肪细胞系是目前应用最为广泛的模型，主要包括从小鼠胚胎中分离出来的3T3-L1、3T3-F442A和NIH3T3前体脂肪细胞系。3T3-L1由于它显示出强烈的接触抑制作用，细胞趋于同步化，所以能明确地识别已发生转化的细胞，且前体脂肪细胞分化过程与脂肪组织中前体脂肪细胞增生分化相似，因此脂肪前体细胞常用来体外研究脂肪细胞终末分化和脂肪形成。

对于3T3-L1前脂肪细胞系而言,传统诱导方法称之为“鸡尾酒”诱导法，即在3T3-L1前脂肪细胞完全汇合后开始，接触抑制2天后,用加入含有IBMX、地塞米松、胰岛素的培养基Ⅰ培养2天,后续再用含胰岛素的培养基Ⅱ培养2天,之后采用普通高糖培养基培养，2天换一次液，再培养4天。还有学者在此基础上加以改进，例如在培养基Ⅰ的基础上再加入吲哚美辛以增加诱导的成功率和分化效率，但总的诱导周期也并没有缩短。不难看出，传统诱导方法总的诱导时长至少需要8-10天，而且随着研究的深入,发现传统“鸡尾酒”诱导法不仅诱导周期长、而且脂肪细胞转化率低且诱导不均匀。此外,该诱导法对实验操作要求很高，在诱导过程中稍有不慎就会破坏细胞，导致无法诱导成功，还会受细胞的代数以及细胞培养皿类型的影响。如此一来,难以为研究者提供数量一致、分化稳定的脂肪细胞。

所以，一个操作简单、诱导率高、分化均一的体外诱导分化为脂肪细胞的方法对于目前构建脂肪细胞模型尤为迫切。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。目的之二是提供这种构建脂肪细胞模型的方法在肥胖研究中的应用。

本发明技术方案如下。

一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，包括如下步骤：

步骤一、将第2-10代小鼠胚胎成纤维细胞（3T3-L1）接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化下来，离心和重悬，进行传代；