[发明专利]用液相芯片技术检测心血管疾病药物基因多态性的特异性引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用液相芯片技术同时检测15种心血管类药物相关靶基因多态性的引物组，包括15组引物，其中每组引物包括用于检测一种靶基因多态性的一对特异性扩增引物以及分别针对所述靶基因的野生型和突变型的两条ASPE引物。本发明还公开了包含这些引物组的试剂盒及其使用方法。本发明的引物组及其试剂盒可以在一步PCR反应中扩增靶序列，并联合MagPlex微球同时检测15种常见心血管类药物相关靶基因多态性，检测通量高，性价比高，一次检测可提供心血管疾病患者的用药指导，为临床合理用药提供实验室依据；本发明的试剂盒在实际应用中具有非常好的灵敏度、稳定性和准确率，与基因测序结果吻合良好，又大大降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，具体涉及利用液相芯片技术检测常用心血管疾病药物基因多态性的特异性引物，本发明还涉及包含这些特异性引物的试剂盒及试剂盒使用方法。

背景技术

心血管疾病是心脏和血管疾患引起的，包括冠心病(心脏病发作)、脑血管疾病(中风)、高血压(血压升高)、周围血管疾病、风湿性心脏病、先天性心脏病、心力衰竭以及心肌病。心血管疾病是一种严重威胁人类、特别是50岁以上中老年人健康的常见病。目前，心血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为45.01％，城市为42.61％。据统计，约三分之一并非死于疾病本身，而是死于不合理用药。心血管疾病精准个体化用药是安全用药的保障，使医生可以为患者个性化选择药物种类和用药剂量。

临床常见的心血管疾病治疗药物包括氯吡格雷、华法林、硝酸甘油、阿司匹林等等。由于个体差异的存在，不同患者服用相同药物所获得的治疗效果不尽相同。越来越多的研究发现患者的遗传因素是影响药物代谢、吸收及排泄的重要因素，目前，已经检测出数十种酶在不同的个体中活性不甚相同，随着CYP2C9、VKORC1、CYP4F2、CYP2C19、PON1、CYP2D6、ADRB1、ALDH2、GP1BA、PEAR1、AGTR1等与药物吸收、分布、代谢和排泄相关的重要基因的单个甘酸多态性(SNP)被陆续发现，通过对各种心血管类药物靶位基因多态性的检测来决定药物的选择或使用剂量是至关重要的协助临床精准用药手段。

CYP2C9基因、VKORC1基因及CYP4F2基因多态性与华法林个体化用药相关性

华法林(warfarin)是香豆素类口服抗凝药，是目前临床上应用最广泛的口服抗凝药物之一，但临床疗效和不良反应个体差异很大，剂量很难掌握。研究表明，维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位I基因(VKORC1)的基因多态性和细胞色素P450基因(CYP2C9)是影响华法林用量个体差异最主要的两个遗传因素。此外，CYP4F2基因的多态性(rs2108622)也与华法林个体剂量差异相关。

CYP2C19基因多态性与氯吡格雷个体化用药相关性

氯吡格雷(Clopidogrel)，为口服抗血小板药物，目前已经广泛应用于急性冠状动脉综合征(ACS)和PCI术后治疗，可以有效预防ACS患者的缺血时间的发生。该药品经体内P450酶生物转化后可与血小板表面ADP受体P2Y12发生不可逆的结合，从而抑制ADP诱导的血小板的聚集，达到抗凝血的功效。因此，细胞色素P450基因(CYP2C19)则是影响氯吡咯雷用量个体差异最主要的遗传因素。

ALDH2基因多态性与硝酸甘油的个体化用药相关性-

ALDH2是人体催化硝酸甘油生物转化的主要途径，该酶同时具有脱氢酶和酯酶的催化活性，其酯酶活性可以通过将硝酸甘油脱硝产生NO，进而引起血管扩张。ALDH2基因位于第12号染色体的12q24.2位置，全长43,438bp，共有13个外显子，编码由517个氨基酸残基组成的多肽，由于遗传，在人群中该酶基因型出现3种情况，具有正常催化活性纯合子型：ALDH2*1/*1；催化活性下降的杂合子型：ALDH2*2/*1；催化活性失去的纯合子型：ALDH2*2/*2。近几年研究显示ALDH2能够改善心力衰竭的预后、保护心肌缺血再灌注损伤，基因突变后造成酶活性下降，增加冠心病(CAD)和心肌梗死(MI)的风险。