[发明专利]弱精子症相关的GRP78基因SNP标志物及其应用

说明书

本发明公开一种弱精子症相关的GRP78基因SNP标志物及其应用，涉及基因工程和生殖医学技术领域。本发明采用多重单碱基延伸技术分析GRP78基因多个位点多态性与弱精症的相关性，得出GRP78基因rs3216733和rs391957 SNP与弱精症发生存在相关性，可下调其蛋白表达而增加弱精症发生风险，可作为辅助诊断弱精子症的试剂或试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因工程和生殖医学技术领域，具体的涉及一种弱精子症相关的GRP78基因SNP标志物及其应用。

背景技术

不孕不育发病率逐年上升，严重影响约10％～15％育龄夫妇，其中男性因素被认为在不孕不育中起着至关重要的作用。导致男性不育病因复杂多样，其中弱精子症为重要致病因素之一。弱精子症是指精子活动力下降而导致男性不育的疾病，表现为前向运动精子小于32％。其发病机制与感染、精液液化异常、内分泌因素、免疫因素、遗传性因素等相关，但到目前为止尚未完全阐明。近年来，单核苷酸多态性(SNP)与男性不育的相关性研究被许多学者青睐。

葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78，GRP78)是一个多功能基因，GRP78是热休克蛋白70家族(heat shock protein， Hsp70)的成员之一，又称为免疫球蛋白重链结合蛋白 (immunoglobulin heavy chain binding protein，Bip)，高度保守的GRP78基因序列具有调节内质网钙稳态、阻止内质网新生肽聚集、启动未折叠蛋白反应等作用；葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平与精子活力密切相关，其可能机制为GRP78调节精子细胞内钙离子的水平而影响其活力；GRP78基因SNPs与多种疾病相关，功能性突变或缺失可调节其蛋白表达。有研究报道GRP78蛋白的表达在精子活力正常组和弱精子症组中存在差异，即在弱精子症组中GRP78蛋白的表达相对下降，提示GRP78与弱精子症的发生密切相关，但目前，尚未有GRP78基因多态性与男性不育弱精症相关性研究报道，同时目前也缺乏具体明显的标志物来确定其与弱精子症发病风险的关联。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明采用多重单碱基延伸技术分析GRP78基因多个位点多态性与弱精症的相关性，得出GRP78基因rs3216733和rs391957SNP与弱精症发生存在相关性，可下调其蛋白表达而增加弱精症发生风险，可作为辅助诊断弱精子症的试剂或试剂盒。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：

一种弱精子症相关的GRP78基因SNP标志物，该标志物为：GRP78 基因rs3216733和rs391957SNP。

所述标志物筛选方法为：采用多重单碱基延伸技术分析GRP78 基因多个位点：rs3216733，rs17840761，rs17840762，rs391957位点进行基因分析；

在Primer 3.0引物软件设计待测SNP位点的所需引物，并合成；

通过对外周血提取的DNA样本PCR扩增后进行基因分型，包括 PCR产物的纯化、碱基延伸PCR及纯化、芯片点样；

统计分析，得出：rs3216733C/D基因型和rs391957C/T基因型显著增加弱精症易感性；单体型分析显示由rs3216733，rs17840761， rs17840762，rs391957构建的单体型C-G-G-T能显著增加弱精症发病风险。

所述标志物GRP78基因rs3216733和rs391957SNP与弱精症发生存在相关性，可下调其蛋白表达而增加弱精症发生风险。

进一步的，在Primer 3.0引物软件设计待测SNP位点的所需引物， rs3216733_rs17840761_rs17840762_rs391957四个位点共同正向引物：CCCCTCCGCAATAAACGTCACTG