[发明专利]一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒。其特征在于，所述试剂盒内含有纯化后的优势抗原表位MDA5蛋白。本发明还公开了一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒的检测方法。本发明的有益效果在于：MDA5全长表达困难，技术要求高，购买成品化的MDA5全长蛋白价格更是昂贵。本申请在寻找MDA5优势抗原表位的基础上，表达合成抗原，大大的缩减了成本。本发明的试剂盒，能用于抗MDA5抗体检测，弥补了抗MDA5抗体检测方法的空白，具有检测通量大、结果确切、灵敏度高、操作简便的特点，易于推广和应用。

技术领域

本发明属于抗体检测领域，具体涉及一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒及其检测方法。

背景技术

皮肌炎(Dermatomyositis，DM)是临床上较常见的危及生命的炎症性肌病，主要累及皮肤、肌肉。目前认为属于自身免疫病范畴。皮肌炎年发病率在0.5-1/10万人左右，且呈上升趋势。在临床实践中我们观察到累及皮肤或以皮肤为主要受累器官的DM患者，我们称其为“无肌病性皮肌炎(Clinically Amyopathie Dermatomyositis，CADM)”的患者，预后极差。根据已有报道和我科临床资料显示，DM/CADM较PM预后差的原因是间质性肺炎(Interstitial Lung Disease，ILD)的发生率极高，是DM/CADM患者死亡的首要原因。

抗MDA5(黑素瘤分化基因5)抗体不仅是DM/CADM合并ILD的特异性抗体，还是DM/CADM患者伴发急进型肺间质病变的血清学标记，该抗体水平与肺间质病变的发生和病情严重程度高度正相关，且与皮肤溃疡、血管炎的发生高度正相关。动态观察血清中该抗体水平有助于预测病情演变、指导临床治疗。

目前国内市场上还未出现市场化的抗MDA5抗体检测试剂盒，因此，鉴于检测抗MDA5抗体的重要性，开发一种可以广泛应用，高效灵敏的抗MDA5抗体检测试剂盒以及相应的检测方法对于预测病情演变、指导临床治疗就显得尤为紧要。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明的目的之一在于提供了一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒，所述试剂盒内含有纯化后的优势抗原表位MDA5蛋白。

在本发明的一个优选实施例中，所述纯化后的优势抗原表位MDA5蛋白氨基酸序列组为：

Asn-Ser-Asn-Met-Gly-Ser-Asp-Ser-Gly-Thr-Met-Gly-Ser-Asp-Ser-AspGlu-Glu-Asn-Val-Ala-Ala-Arg-Ala-Ser-Pro-Glu-Pro-Glu-Leu-Gln-LeuLeu-Leu-Asn-Leu-Glu-Asn-Gly-Glu-Asp-Ala-Gly-Val-Gln-Leu-Ser-AspPhe-Ser-Leu-Ile-Ile-Ile-Asp-Glu-Cys-His-His-Thr-Asn-Lys-Glu-AlaVal-Tyr-Asn-Asn-Ile-Met-Arg-His-Tyr-Leu-Met-Gln-Lys-Leu-Lys-AsnLeu-Gly-Leu-Thr-Ala-Ser

在本发明的一个优选实施例中，所述试剂盒内设有抗MDA5抗体检测板条，该检测板条为包被优势抗原表位MDA5蛋白的96孔酶标板。

在本发明的一个优选实施例中，所述试剂盒内还设有阴性对照血清、阳性对照血清、血清稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物显色液、终止液。

在本发明的一个优选实施例中，所述的阴性对照血清为CADM患者免疫印迹法检测抗MDA5抗体阴性血清，所述的阳性对照血清为CADM患者免疫印迹法检测抗MDA5抗体阳性血清，所述的酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG。

本发明的目的之二在于提供一种用于检测抗MDA5抗体的ELISA试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

(1)优势抗原表位MDA5蛋白包被96孔板，4度过夜；