[发明专利]一种安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法

说明书

本发明提供了一种安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法。所述的固体培养基中包含如下各重量份组分：麦麸：40‑55份，玉米粉：18‑25份，豆粕：2‑5份，钙盐粉：0.5‑2份，稻谷壳：20‑30份，白砂糖：1‑5份，磷酸二氢钾：0.01‑0.2份，硫酸镁：0.01‑0.2份，水：80‑100份。所述方法按如下步骤进行：1、固体培养基的制备及灭菌；2、接种；3、培养；4、干燥。使用该培养基培养的安络小皮伞干菌体中，大幅提高了安络小皮伞乙醇提取物及水溶物中蛋白多糖等有效物质的含量，生长速度优势明显。

技术领域

本发明涉及到生物制药领域，特别涉及到一种安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法。

背景技术

安络小皮伞干菌体是生产药品安络痛片的主要成分，安络痛具有通经活络和活血止痛的作用。安络小皮伞菌丝、菌索中含蛋白多糖、甘露醇、氨基酸、对羟基桂皮酸、胆甾醇、二十八碳酸等多种化学成分。安络小皮伞干菌体是采用白磨科皮伞属安络小皮伞菌经菌种培养，再经固体培养基培养、干燥所得。常规固体培养基是麦麸、稻谷壳、水。据相关资料目前经优化后固体培养基的组分是用麦麸、白砂糖、稻谷壳、磷酸二氢钾、硫酸镁、水。现有的培养基中由于添加了稻谷壳增加培养基透气性便于安络小皮伞菌丝体生长，这样使得以麦麸为主要原料的蛋白质含量（氮源）以及以白砂糖为主的碳源，所能提供的营养物质有限，影响细胞的繁殖。碳氮比过低不利于细胞生长和外源蛋白的表达和积累，导致菌体提早自溶，过高导致细胞代谢不平衡，最终不利于代谢产物的积累。再者现有的培养基中虽然提供了利于安络小皮伞生长的无机盐包括钾、镁、磷等，但还是缺乏某些元素或含量不足，将还会继续影响微生物的生长和繁殖、生物酶的合成以及催化活性，使代谢反应无法正常进行。但现有的培养基在使用时，存在有如下缺陷：1、使用该固体培养基培养得到的安络小皮伞干菌体，生长速度一般；2、代谢产物中乙醇提取物含量及水溶物中蛋白多糖含量等有效物质含量低；3、各种鉴别反应不明显，药效作用不好；4、因此制造成本高，药效疗效差等。

河南大学2014年硕士论文：张晶晶，《安络小皮伞液体发酵条件的优化及其活性的研究》以提高安络小皮伞菌生物量为目的，对小皮伞菌培养基及其发酵条件进行系统优化，对C源和N源种类进行筛选。在此基础上对其浓度进行优化，通过正交试验对小皮伞菌培养基成份进行优化，最终确立最优培养基为：玉米粉3%、麸皮3%、MgSO₄ 0.1%、KH₂PO₄ 0.3%、VB110mg、水1000ml，该培养基对C源和N源种类进行了筛选，但仅针对液体发酵培养基。

食用菌1983年第03期：陈国良，《固体培养安络小皮伞菌丝的研究》采用甘蔗渣、麦麸（蔗渣78%、麦麸20%、蔗糖和石膏粉各1%）和木屑、麦麸（木屑78%、麸皮20%、蔗糖和石膏粉各1%）把含水量、培养基PH值作为变量，以之确立对安络小皮伞菌生长速度的影响，该固体培养基添加了石膏，以之作为钙源。 该固体培养基中C源及N源比例及种类并为进行优化和组合。

《中华人民共和国卫生部药品标准》书页号Z5-62标准编号WS3-B-0931-91菌丝培养基：麦麸75g、稻谷壳25g、水适量。该固体菌丝体培养基为一般性普通培养基。

发明专利公布号CN101879189A，漯河市方汇药业有限公司，张秀芬，《采用优化固体培养基生产安络痛菌粉的方法》其中所述培养基由以下重量份的组分组成：麦麸50-80份、稻谷壳20-30份、口服葡萄糖5-20份、磷酸二氢钾0.5-0.2份、硫酸镁0.025-0.1份，加水至100份，该专利强调了各种无机钾盐，尤其是磷酸钾盐可作为钾源，这些物质对小皮伞菌生长有促进作用，使得培养时间短，菌丝收得率高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能调整氮、碳比例的安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法。